糖尿病心血管并發(fā)癥新機(jī)制及新型藥物治療研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進(jìn)行論述：
　　第一部分 糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化新機(jī)制研究——PPARγ小泛素樣修飾介導(dǎo)糖尿病加速動(dòng)脈粥樣硬化的新機(jī)制研究
　　目的：糖尿病(DM)可激活NF-KB下游炎癥反應(yīng)，加速動(dòng)脈粥樣硬化。過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)是一種廣泛表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子。新近的研究表明，PPARγ發(fā)生小泛素樣修飾后，能夠抑制NF-κB下游炎癥反應(yīng)。Ubc9是PPARγ小泛素樣修飾的關(guān)鍵酶，在心肌、骨骼肌等組織中，DM

2、能下調(diào)Ubc9表達(dá)量，影響目標(biāo)蛋白的小泛素樣修飾。然而，在血管組織和內(nèi)皮細(xì)胞中，DM是否能通過(guò)下調(diào)Ubc9表達(dá)量并降低PPARγ小泛素樣修飾尚未明確。
　　方法:構(gòu)建1型糖尿病和頸動(dòng)脈球囊損傷大鼠模型，通過(guò)血管超聲和組織學(xué)檢測(cè)評(píng)價(jià)DM對(duì)血管的損傷。通過(guò)Wester Blot和免疫組化染色評(píng)價(jià)血管組織內(nèi)Ubc9的表達(dá)情況，通過(guò)小泛素樣修飾試劑盒檢測(cè)PPARγ小泛素樣修飾程度。體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)，通過(guò)不同時(shí)程不同濃

3、度的高糖刺激評(píng)價(jià)高糖對(duì)PPARγ小泛素樣修飾程度的影響，并用Real time-RT-PCR和Western Blot的方法檢測(cè)HUVEC炎癥基因表達(dá)量和Ubc9表達(dá)情況。在體內(nèi)和體外通過(guò)過(guò)表達(dá)Ubc9或PPARγ受體激動(dòng)劑羅格列酮提高PPARγ小泛素樣修飾程度，評(píng)價(jià)其是否對(duì)DM放大的血管損傷有保護(hù)作用。
　　結(jié)果:血管超聲和組織學(xué)分析表明DM大鼠血管損傷后內(nèi)膜增殖程度較對(duì)照組顯著增加。同時(shí)，DM大鼠血管組織中Ubc9的表達(dá)量較對(duì)

4、照組大鼠出現(xiàn)顯著下調(diào)，PPARγ小泛素樣修飾程度明顯下降。體外培養(yǎng)HUVEC中，高糖培養(yǎng)造成炎癥基因IL-8，IL-1β表達(dá)量上升，同時(shí)造成Ubc9的表達(dá)量下調(diào)及PPARγ小泛素樣修飾程度明顯下降，并呈時(shí)間和糖濃度依賴性。在體內(nèi)和體外分別采用過(guò)表達(dá)Ubc9或羅格列酮提高PPARγ小泛素樣修飾程度后，HUVEC炎癥基因表達(dá)較高糖培養(yǎng)組明顯回落，血管內(nèi)膜增殖程度也出現(xiàn)顯著改善。
　　結(jié)論:本研究證實(shí)了高血糖對(duì)大鼠動(dòng)脈組織和血管內(nèi)皮細(xì)胞

5、中Ubc9表達(dá)量的下調(diào)作用以及對(duì)PPARγ小泛素樣修飾的抑制作用，進(jìn)一步通過(guò)過(guò)表達(dá)Ubc9和使用PPARγ受體激動(dòng)劑減緩了高血糖對(duì)血管的損傷，提示高血糖導(dǎo)致的Ubc9下調(diào)和PPARγ小泛素樣修飾程度下降是DM易化的動(dòng)脈粥樣硬化的重要機(jī)制，并為DM動(dòng)脈粥樣硬化的治療提供了新的線索。
　　第二部分 糖尿病心肌病新型藥物研究——齊墩果酸通過(guò)內(nèi)皮素受體A拮抗作用在高糖導(dǎo)致的心肌損傷中發(fā)揮保護(hù)作用
　　目的:高糖刺激會(huì)導(dǎo)致內(nèi)皮素-1(

6、ET-1)和及其受體表達(dá)量升高，這可能是加重糖尿病心血管并發(fā)癥的重要原因。齊墩果酸是一種在植物中廣泛存在的小分子化合物，前期研究證實(shí)其有潛在的內(nèi)皮素受體A(ETA)拮抗作用。但齊墩果酸是否能在糖尿病造成的心肌損傷中發(fā)揮作用尚缺乏相關(guān)研究。
　　方法:利用大鼠乳鼠原代心肌細(xì)胞構(gòu)建高糖損傷模型，利用Real time-RT-PCR和細(xì)胞免疫熒光染色分別檢測(cè)BNP在基因和蛋白水平的，通過(guò)TMRM染色評(píng)價(jià)線粒體膜電位和氧化應(yīng)激反應(yīng)，通過(guò)免

7、疫熒光染色測(cè)量心肌細(xì)胞面積，反映心肌細(xì)胞損傷狀態(tài)。通過(guò)計(jì)算機(jī)模擬ETA蛋白晶體結(jié)構(gòu)和分子對(duì)接探索齊墩果酸與ETA發(fā)生相互作用的可能性，并利用人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPS)分化的心肌細(xì)胞和心肌細(xì)胞實(shí)時(shí)檢測(cè)系統(tǒng)驗(yàn)證齊墩果酸對(duì)ET-1通路的抑制作用。
　　結(jié)果:高糖培養(yǎng)導(dǎo)致心肌細(xì)胞表面積增大，線粒體膜電位增加，BNP在基因水平和蛋白水平表達(dá)上調(diào)，同時(shí)導(dǎo)致ETA表達(dá)上調(diào)，且恢復(fù)低糖培養(yǎng)后心肌損傷和ETA上調(diào)均不能完全恢復(fù)，但ETA受體波生坦能

8、夠逆轉(zhuǎn)高糖造成的心肌損傷。齊墩果酸在分子對(duì)接試驗(yàn)中能與ETA受體發(fā)生相互作用，且能改善ET-1導(dǎo)致的iPS心肌細(xì)胞搏動(dòng)功能改變。齊墩果酸能夠有效緩解高糖造成的心肌細(xì)胞損傷。
　　結(jié)論:本研究證實(shí)，高糖能夠造成心肌細(xì)胞損傷，并產(chǎn)生代謝記憶效應(yīng)，ETA在高糖刺激后的持續(xù)高表達(dá)可能是造成代謝記憶效應(yīng)的重要原因。齊墩果酸是潛在的ETA受體拮抗劑，能夠在高血糖造成的心肌細(xì)胞損傷中發(fā)揮保護(hù)作用。
　　第三部分 光學(xué)相干斷層成像檢測(cè)冠狀動(dòng)

9、脈支架植入術(shù)后支架絲周圍低密度區(qū)域的危險(xiǎn)因素和預(yù)后分析。
　　目的:支架絲周圍低密度區(qū)域(PLIA)是PCI術(shù)后患者進(jìn)行光學(xué)相干斷層成像(OCT)時(shí)呈現(xiàn)的一種圖像特征，既往認(rèn)為與支架內(nèi)膜修復(fù)狀態(tài)有關(guān)，但PLIA的臨床因素及其預(yù)后缺乏相關(guān)研究。本研究旨在探索PLIA的危險(xiǎn)因素，并對(duì)其進(jìn)行預(yù)后分析。
　　方法:連續(xù)入選PCI術(shù)后6個(gè)月以上接受OCT復(fù)查的患者，根據(jù)OCT圖像性質(zhì)分為PLIA組和非PLIA組，比較兩組的臨床特征及與

10、其他OCT檢測(cè)所得圖像特征的關(guān)系，并進(jìn)行二元Logistic回歸分析，分析PLIA的危險(xiǎn)因素。對(duì)復(fù)查OCT后為進(jìn)行PCI治療的患者進(jìn)行預(yù)后觀察，評(píng)價(jià)PLIA患者的預(yù)后。
　　結(jié)果:共入選128例PCI術(shù)后OCT復(fù)查的患者，其中PLIA組22例(17.2％).PLIA的發(fā)生與甘油三酯(odds ratio[OR]:2.11，95％CI:1.14-3.90，P=0.017)，低密度脂蛋白(LDL,OR:2.61，95％CI:1.22-

11、5.66，P=0.015)，腦血管病史(OR:101.11，95％CI:6.54-1562.13，P＜0.001)和急性冠脈綜合征(ACS，OR:18.77，95％CI:2.73-128.83，P=0.003)呈正相關(guān)，與支架植入時(shí)間呈負(fù)相關(guān)(OR:0.57，95％CI:0.33-0.98，P=0.043)。共96名患者完成中位時(shí)間為3.8年的隨訪，7(7.3％)例患者發(fā)生主要心血管不良事件，與PLIA無(wú)顯著相關(guān)性。不穩(wěn)定心絞痛在PLI