丹參素鈉調(diào)節(jié)MAPKs通路抗動脈粥樣硬化小鼠內(nèi)皮細胞損傷的機制研究.pdf

1、動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是心腦血管疾病的的主要誘因，血管內(nèi)皮功能障礙是AS的起始步驟。氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)可引起血管內(nèi)皮細胞結(jié)構(gòu)和功能的改變。本課題在前期實驗研究基礎上以丹參有效活性成分丹參素鈉(DSS)來探討其減輕血管內(nèi)皮損傷信號通路，進一步擴展其對中藥復方定心方在抗AS治療的藥理機制研究，為中醫(yī)藥防治AS尋找新的靶點。
　　目的:
　　從動物和細胞水平探討DSS對ox-LDL誘導

2、動脈粥樣硬化小鼠血管內(nèi)皮細胞損傷的保護作用及可能機制。
　　方法:
　　(1)動物實驗
　　SPF級8周齡雄性ApoE基因敲除(Apo E-/-)小鼠50只，以人血清低密度脂蛋白(LDL)誘導血管內(nèi)皮損傷的方法建立APoE-/-小鼠AS血管損傷模型。隨機分為5組，每組10只，分別為:①對照組、②模型組、③DSS-L、④DSS-M、⑤DSS-H，②、③、④、⑤組均給予DSS2.5、5、7.5mg/kg腹腔注射，每日一次;

3、①組灌服等劑量生理鹽水，實驗16周。
　　(2)細胞實驗
　　采用ox-LDL誘導HUVEC損傷的方法建立細胞模型。濃度梯度組:分別以0、25、50、100 mg/L的ox-LDL作用HUVEC24h。時間梯度組:以50mg/Lox-LDL作用HUVEC0，3，6，12，24 h。干預組:①對照組②DSS組③ox-LDL+DSS組④ox-LDL組⑤ox-LDL+SB203580⑥ox-LDL+ SP600125。
　　

4、結(jié)果:
　　(1)小鼠血脂檢測結(jié)果顯示:模型組顯著高于對照組(P＜0.05)，與模型組相比，DSS-M與DSS-H血清TC、TG、LDL-C顯著降低(P＜0.05)。
　　(2)小鼠主動脈AS斑塊病理形態(tài)學觀察:模型組較對照組有較明顯的AS斑塊形成，DSS可劑量依賴性抑制AS斑塊形成(P＜0.05)。
　　(3)小鼠主動脈AS斑塊LDL的表達:各給藥組LDL表達較模型組均顯著降低(P＜0.05); DSS-H組顯著低于

5、DSS-L、DSS-M組(P＜0.05)。
　　(4)小鼠主動脈LDL蛋白表達:與模型組相比，DSS-M、DSS-H組顯著抑制LDL蛋白表達(P＜0.05)。
　　(5)小鼠血清ET-1檢測結(jié)果顯示:與對照組相比，模型組小鼠的血漿ET-1含量水平顯著增高(P＜0.05)，DSS-M組顯著低于模型組(P＜0.05)。
　　(6)ox-LDL對HUVEC增殖的影響:濃度梯度組:與模型組相比，25、50、100 mg/L o

6、x-LDL組均可顯著抑制HUVEC增殖(P＜0.05)，25、50、100 mg/Lox-LDL組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。時間梯度組:與對照組相比，50 mg/Lox-LDL作用12h、24 h后均能抑制HUVEC增殖(P＜0.05)。
　　(7)ox-LDL對HUVEC凋亡的影響:濃度梯度組:與模型組相比，50、100mg/L ox-LDL作用24h后可顯著提高早、晚期凋亡率％(P=0.00)，兩組間無顯著差異(P＞0

7、.05)。時間梯度組:50 mg/L ox-LDL作用12、24h后均可提高早、晚期凋亡率％(P=0.001)。
　　(8)ox-LDL對HUVEC中p-p38 MAPK蛋白表達影響:濃度梯度組:100 mg/Lox-LDL作用24 h后達到峰值(P=0.00)。時間梯度組:50 mg/L ox-LDL作用3h、6h后均可提高HUVEC中p-p38 MAPK蛋白表達(P＜0.05)。
　　(9)ox-LDL對HUVEC中的p

8、-JNK蛋白表達影向:濃度梯度組:25、50 mg/Lox-LDL作用12 h后可顯著提高HUVEC中p-JNK蛋白的表達(P=0.00)。時間梯度組:50 mg/L ox-LDL作用3、6h后均可提高HUVEC中的p-JNK蛋白表達(P＜0.05)，兩組間無顯著差異(P＞0.05)。
　　(10)DSS對ox-LDL影響HUVEC細胞內(nèi)p-p38 MAPK、p-JNK蛋白表達影響:與模型組相比，DSS-M和DSS-H組能夠顯著抑

9、制HUVEC中p-p38 MAPK、p-JNK蛋白表達(P=0.00)，兩組間無顯著差異(P＞0.05)。
　　(11)DSS對ox-LDL影響HUVEC分泌TNF-α、IL-6的干預作用:與模型組相比，25、200mg/L DSS預處理HUVEC24h后降低HUVEC分泌IL-6水平(P＜0.05)，兩組間無顯著差異(P＞0.05);50、200mg/L DSS預處理HUVEC24h后降低HUVEC分泌TNF-α水平(P＜0.0

10、5)，兩組間無顯著差異(P＞0.05)。
　　(12)DSS及MAPKs通路抑制劑對ox-LDL影響HUVEC增殖的干預作用:與模型組相比，100 mg/L DSS組可減輕ox-LDL對HUVEC增殖的抑制作用(P=0.00)，SP600125及SB203580均可減輕ox-LDL對HUVEC增殖的抑制(P＜0.05)。
　　(13)DSS及MAPKs通路抑制劑對ox-LDL影響HUVEC凋亡的干預作用:與模型組相比，50、

11、100 mg/L DSS均可顯著降低早、晚期凋亡率％(P=0.00)，兩組間無顯著差異(P＞0.05)，SP600125及SB203580均可降低早、晚期凋亡率％(P=0.001)。
　　結(jié)論:
　　動物實驗證實DSS可通過降血脂、ET-1，減少IL-6、TNF-α，抑制AS斑塊形成和下調(diào)LDL表達等方面延緩AS的發(fā)生發(fā)展。細胞實驗證實ox-LDL可抑制HUVEC增殖并促進其凋亡、可誘導HUVEC分泌炎癥因子，DSS可通過增