長(zhǎng)期噪聲暴露對(duì)大鼠海馬、皮層CRF信號(hào)系統(tǒng)的影響及其與P-tau關(guān)系的研究.pdf

1、隨著現(xiàn)代工業(yè)社會(huì)的不斷發(fā)展，噪聲危害日益嚴(yán)重，交通、社會(huì)生活、工業(yè)及一些特殊環(huán)境噪聲無(wú)時(shí)無(wú)刻不在影響人們的工作、學(xué)習(xí)和生活。前期研究結(jié)果顯示，長(zhǎng)時(shí)間慢性噪聲暴露可以引發(fā)大鼠海馬、皮層部位的tau蛋白過(guò)度磷酸化及Aβ異常蓄積等阿爾茨海默病樣改變(Alzheimer's disease，AD)，但噪聲刺激致神經(jīng)系統(tǒng)損傷的具體機(jī)制尚不清楚。在非噪聲應(yīng)激導(dǎo)致的tau異常磷酸化過(guò)程中，促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(Corticotropin-rele

2、asing factor, CRF)信號(hào)系統(tǒng)起到了關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。本課題旨在以CRF信號(hào)系統(tǒng)為研究切入點(diǎn)，擬從基因、蛋白及定位表達(dá)三個(gè)層面探討噪聲暴露對(duì)海馬、皮層CRF信號(hào)系統(tǒng)的影響及其與p-tau的定位關(guān)系，為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)噪聲暴露致AD樣神經(jīng)系統(tǒng)損傷效應(yīng)機(jī)制及有效預(yù)防措施的制定提供理論依據(jù)。
　　目的：探討及明確長(zhǎng)期噪聲暴露后大鼠HPA軸及海馬、皮層CRF信號(hào)系統(tǒng)的變化及其與AD樣變之間的作用關(guān)系，以期進(jìn)一步認(rèn)識(shí)長(zhǎng)期噪聲暴露致AD

3、樣變的可能的信號(hào)機(jī)制。
　　方法：實(shí)驗(yàn)對(duì)象選擇Wistar健康雄性大鼠(200-220g)64只，在適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境5天后，隨機(jī)分為對(duì)照組和噪聲暴露組，每組32只，暴露條件為95 dB白噪聲，4 h/d×30 d，停止噪聲暴露分別恢復(fù)0、3、7、14 d，對(duì)照組動(dòng)物除不接受噪聲暴露外，其他條件均與暴露組相同。兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別在各個(gè)恢復(fù)期(0、3、7、14d)相同時(shí)間點(diǎn)處死大鼠，每組取6只大鼠通過(guò)腹主動(dòng)脈取血分離血漿，采用Elisa法測(cè)

4、定血漿皮質(zhì)酮(CORT)水平;分離大鼠海馬、皮層組織分別采用RT-PCR法檢測(cè)CRF及其受體CRFR1、CRFR2mRNA的表達(dá)變化，Western blot法檢測(cè)CRF、CRFR1、CRFR2的蛋白表達(dá)變化。每組剩余兩只大鼠采用水合氯醛麻醉后先后用生理鹽水和4％的多聚甲醛進(jìn)行心臟灌注，灌注結(jié)束后分離出大鼠大腦組織后進(jìn)行一系列脫水、石蠟包埋，采用石蠟切片機(jī)切取6um厚的海馬、皮層組織切片。采用免疫熒光雙標(biāo)法對(duì)組織切片進(jìn)行CRF與p-ta

5、u的雙重標(biāo)記，在熒光顯微鏡下觀(guān)察海馬、皮層神經(jīng)元中CRF與p-tau的表達(dá)定位情況。
　　結(jié)果：⑴停止噪聲接觸后分別恢復(fù)0、3、7、14天時(shí)對(duì)噪聲接觸組和對(duì)照組大鼠血漿皮質(zhì)酮表達(dá)水平進(jìn)行Elisa檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示從停止噪聲接觸后恢復(fù)0天時(shí)開(kāi)始噪聲接觸組大鼠血漿皮質(zhì)酮水平顯著高于對(duì)照組，這一趨勢(shì)一直持續(xù)到恢復(fù)7天之后，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），到恢復(fù)14天時(shí)噪聲接觸組大鼠血漿皮質(zhì)酮恢復(fù)到對(duì)照組水平，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0

6、.05）。⑵停止噪聲刺激接觸后分別恢復(fù)0、3、7、14天時(shí)對(duì)噪聲暴露組和對(duì)照組大鼠海馬、皮層CRF、CRFR1、CRFR2 mRNA和蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在恢復(fù)0天時(shí)噪聲接觸組大鼠CRF和CRFR1 mRNA水平顯著高于對(duì)照組，且這一顯著趨勢(shì)一直持續(xù)到恢復(fù)7天之后，差異有顯著性(P＜0.05)，到第14天時(shí)恢復(fù)到正常水平;兩者蛋白表達(dá)水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的變化情況同其基因表達(dá)趨勢(shì)相同，同樣在第14天時(shí)恢復(fù)到正常水平;CRFR

7、2 mRNA水平在停止噪聲接觸恢復(fù)0天時(shí)噪聲接觸組與對(duì)照組無(wú)顯著性差異，到恢復(fù)3天時(shí)噪聲接觸組表達(dá)水平顯著升高，這一趨勢(shì)一直持續(xù)到恢復(fù)第14天之后(P＜0.05）;其蛋白表達(dá)水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的變化情況同其基因表達(dá)變化趨勢(shì)相同。提示噪聲刺激接觸顯著影響了大鼠海馬、皮層CRF系統(tǒng)的表達(dá)情況。⑶在大鼠海馬和皮層組織中都能檢測(cè)到CRF和p-tau的表達(dá)，為進(jìn)一步檢測(cè)兩者的定位情況采用免疫熒光雙標(biāo)法對(duì)海馬和皮層組織切片進(jìn)行熒光標(biāo)記，標(biāo)記結(jié)果顯示，

8、CRF（綠色熒光標(biāo)記）在神經(jīng)元胞漿中存在表達(dá)，p-tau（紅色熒光標(biāo)記）也定位于神經(jīng)元胞漿中，將兩者重疊后Merge（黃色）發(fā)現(xiàn)在部分神經(jīng)元胞漿內(nèi)CRF與p-tau存在同時(shí)表達(dá)，結(jié)果提示在海馬、皮層組織神經(jīng)元中CRF與p-tau存在共定位現(xiàn)象。
　　結(jié)論：①長(zhǎng)期噪聲暴露能夠刺激機(jī)體啟動(dòng)HPA軸，引起大鼠血漿皮質(zhì)酮水平的持續(xù)性顯著升高，使機(jī)體對(duì)應(yīng)激刺激做出反應(yīng)。②長(zhǎng)期噪聲暴露能夠顯著影響大鼠海馬、皮層CRF信號(hào)系統(tǒng)的表達(dá)情況，且具體