長期噪聲暴露對大鼠海馬、皮層CRF信號系統(tǒng)的影響及其與P-tau關系的研究.pdf

1、隨著現(xiàn)代工業(yè)社會的不斷發(fā)展，噪聲危害日益嚴重，交通、社會生活、工業(yè)及一些特殊環(huán)境噪聲無時無刻不在影響人們的工作、學習和生活。前期研究結果顯示，長時間慢性噪聲暴露可以引發(fā)大鼠海馬、皮層部位的tau蛋白過度磷酸化及Aβ異常蓄積等阿爾茨海默病樣改變(Alzheimer's disease，AD)，但噪聲刺激致神經(jīng)系統(tǒng)損傷的具體機制尚不清楚。在非噪聲應激導致的tau異常磷酸化過程中，促腎上腺皮質激素釋放激素(Corticotropin-rele

2、asing factor, CRF)信號系統(tǒng)起到了關鍵的調節(jié)作用。本課題旨在以CRF信號系統(tǒng)為研究切入點，擬從基因、蛋白及定位表達三個層面探討噪聲暴露對海馬、皮層CRF信號系統(tǒng)的影響及其與p-tau的定位關系，為進一步認識噪聲暴露致AD樣神經(jīng)系統(tǒng)損傷效應機制及有效預防措施的制定提供理論依據(jù)。
　　目的：探討及明確長期噪聲暴露后大鼠HPA軸及海馬、皮層CRF信號系統(tǒng)的變化及其與AD樣變之間的作用關系，以期進一步認識長期噪聲暴露致AD

3、樣變的可能的信號機制。
　　方法：實驗對象選擇Wistar健康雄性大鼠(200-220g)64只，在適應實驗環(huán)境5天后，隨機分為對照組和噪聲暴露組，每組32只，暴露條件為95 dB白噪聲，4 h/d×30 d，停止噪聲暴露分別恢復0、3、7、14 d，對照組動物除不接受噪聲暴露外，其他條件均與暴露組相同。兩組實驗動物分別在各個恢復期(0、3、7、14d)相同時間點處死大鼠，每組取6只大鼠通過腹主動脈取血分離血漿，采用Elisa法測

4、定血漿皮質酮(CORT)水平;分離大鼠海馬、皮層組織分別采用RT-PCR法檢測CRF及其受體CRFR1、CRFR2mRNA的表達變化，Western blot法檢測CRF、CRFR1、CRFR2的蛋白表達變化。每組剩余兩只大鼠采用水合氯醛麻醉后先后用生理鹽水和4％的多聚甲醛進行心臟灌注，灌注結束后分離出大鼠大腦組織后進行一系列脫水、石蠟包埋，采用石蠟切片機切取6um厚的海馬、皮層組織切片。采用免疫熒光雙標法對組織切片進行CRF與p-ta

5、u的雙重標記，在熒光顯微鏡下觀察海馬、皮層神經(jīng)元中CRF與p-tau的表達定位情況。
　　結果：⑴停止噪聲接觸后分別恢復0、3、7、14天時對噪聲接觸組和對照組大鼠血漿皮質酮表達水平進行Elisa檢測，實驗結果顯示從停止噪聲接觸后恢復0天時開始噪聲接觸組大鼠血漿皮質酮水平顯著高于對照組，這一趨勢一直持續(xù)到恢復7天之后，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），到恢復14天時噪聲接觸組大鼠血漿皮質酮恢復到對照組水平，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0

6、.05）。⑵停止噪聲刺激接觸后分別恢復0、3、7、14天時對噪聲暴露組和對照組大鼠海馬、皮層CRF、CRFR1、CRFR2 mRNA和蛋白表達水平進行檢測，實驗結果顯示，在恢復0天時噪聲接觸組大鼠CRF和CRFR1 mRNA水平顯著高于對照組，且這一顯著趨勢一直持續(xù)到恢復7天之后，差異有顯著性(P＜0.05)，到第14天時恢復到正常水平;兩者蛋白表達水平在各個時間點的變化情況同其基因表達趨勢相同，同樣在第14天時恢復到正常水平;CRFR

7、2 mRNA水平在停止噪聲接觸恢復0天時噪聲接觸組與對照組無顯著性差異，到恢復3天時噪聲接觸組表達水平顯著升高，這一趨勢一直持續(xù)到恢復第14天之后(P＜0.05）;其蛋白表達水平在各個時間點的變化情況同其基因表達變化趨勢相同。提示噪聲刺激接觸顯著影響了大鼠海馬、皮層CRF系統(tǒng)的表達情況。⑶在大鼠海馬和皮層組織中都能檢測到CRF和p-tau的表達，為進一步檢測兩者的定位情況采用免疫熒光雙標法對海馬和皮層組織切片進行熒光標記，標記結果顯示，

8、CRF（綠色熒光標記）在神經(jīng)元胞漿中存在表達，p-tau（紅色熒光標記）也定位于神經(jīng)元胞漿中，將兩者重疊后Merge（黃色）發(fā)現(xiàn)在部分神經(jīng)元胞漿內CRF與p-tau存在同時表達，結果提示在海馬、皮層組織神經(jīng)元中CRF與p-tau存在共定位現(xiàn)象。
　　結論：①長期噪聲暴露能夠刺激機體啟動HPA軸，引起大鼠血漿皮質酮水平的持續(xù)性顯著升高，使機體對應激刺激做出反應。②長期噪聲暴露能夠顯著影響大鼠海馬、皮層CRF信號系統(tǒng)的表達情況，且具體