探究CUL4B表達對胃癌細胞的影響.pdf

1、據(jù)統(tǒng)計，胃癌是世界上第五大惡性腫瘤，致死率占世界第三位[1]。胃癌在不同國家和地區(qū)之間的發(fā)病率存在很大差異，亞洲地區(qū)胃癌病例數(shù)占世界總病例數(shù)的73.6％，其中中國的胃癌患者數(shù)占世界的42.7％。在2015年中國確診的癌癥病例中，男性的胃癌發(fā)病率占全部癌癥發(fā)病率的第二位，女性的為第三位。針對胃癌的主要治療方法包括手術(shù)切除、化療、免疫療法和定向治療。雖然近年來診斷和治療技術(shù)都有所提高，但是晚期胃癌病人的生存期仍舊低于1年，臨床上缺乏診斷早期

2、胃癌的有效方法，晚期胃癌病人預后很差。
　　CUL4B(Cullin4B)作為支架蛋白參與構(gòu)成E3泛素連接酶復合物Cullin4B-Ring E3 Ligase(CRL4B)，參與調(diào)節(jié)包括細胞周期、細胞信號轉(zhuǎn)導、基因轉(zhuǎn)錄和生物體個體生長發(fā)育等多項重要生命活動。CRL4B不僅可以通過泛素化降解p53和cyclin E參與調(diào)控細胞增殖和衰老過程，還能通過單泛素化H2A蛋白，調(diào)節(jié)靶基因啟動子組蛋白H3的乙?；约凹谆冗^程，從而在表觀

3、遺傳水平上調(diào)控p16、p21、PTGDS、miRNA-371/372等基因的表達。
　　越來越多的證據(jù)顯示CRL4B在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。CRL4B可以通過單泛素化H2AK119，抑制Wnt拮抗因子、PTEN、IGFBP3和miR-194的表達。在宮頸癌、肝癌和非小細胞肺癌等癌癥中，CRL4B通過抑制腫瘤抑癌基因的表達發(fā)揮癌基因的功能。有趣的是，本實驗室還有一項研究結(jié)果提示CUL4B可通過調(diào)節(jié)微環(huán)境中MDSC細胞的分化抑制

4、腫瘤的生長。因此，CUL4B在不同環(huán)境下在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展發(fā)揮不同的功能。截止到目前，CUL4B在胃癌中的作用還未見報道，為了探究CUL4B在胃癌中發(fā)揮的功能，我們首先檢測了CUL4B在胃癌組織中的表達水平，并分析了CUL4B表達對胃癌細胞增殖、遷移侵襲以及對化療藥物敏感性的影響。
　　首先，我們檢測了CUL4B在胃癌和癌旁組織中的表達，結(jié)果顯示，相對于癌旁組織，CUL4B在胃癌組織中表達水平明顯上調(diào)，并且CUL4B的表達與胃癌的

5、病理分級呈正相關(guān)。
　　隨后我們選用了三種胃癌細胞—MKN-45、BGC-823和SGC-7901，利用病毒感染，分別構(gòu)建了三種CUL4B低表達的胃癌細胞系和對應的的空載體對照細胞系，并且構(gòu)建了MKN-45 CUL4B高表達細胞系和對應的空載體對照細胞系。我們利用MTT實驗檢測了CUL4B表達降低后胃癌細胞增殖活性的改變，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CUL4B表達降低抑制胃癌細胞增殖活性。利用流式法檢測細胞周期時我們并未發(fā)現(xiàn)CUL4B表達降低對胃癌細

6、胞周期存在顯著影響，利用細胞動力學分析顯示CUL4B不影響胃癌細胞G1/S其以及M/G1期進程，EdU摻入實驗也顯示CUL4B表達降低對胃癌細胞DNA合成無明顯影響，提示CUL4B調(diào)控胃癌細胞增殖活性并不是通過對以上過程的調(diào)控而實現(xiàn)的。
　　接下來我們利用transwell實驗和劃痕實驗分析CUL4B表達對胃癌細胞遷移侵襲能力的影響，劃痕實驗結(jié)果顯示，相對于對照細胞，CUL4B表達降低的細胞遷移能力明顯下降。
　　隨后，我們

7、采用MTT實驗分析發(fā)現(xiàn)，相對于對照細胞，低表達CUL4B的胃癌細胞對于同等濃度化療藥物順鉑和吡柔比星的敏感性增加。TUNEL實驗分析顯示CUL4B低表達胃癌細胞在順鉑處理后凋亡比例更高。這些結(jié)果表明CUL4B參與調(diào)控胃癌細胞對化療藥物的敏感性。
　　總之，通過本研究我們證實了CUL4B在胃癌中表達上調(diào)，并且CUL4B表達水平與胃癌的病理分級呈正相關(guān);細胞學實驗結(jié)果顯示抑制CUL4B表達會抑制胃癌細胞的增殖活性、侵襲遷移能力并增加胃