CUL4B促進胃癌惡性進展的研究.pdf

1、目的：
　　本研究通過檢測胃癌組織中CUL4B的表達情況來探討胃癌組織中CUL4B的表達水平與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系；本研究采用siRNA干擾技術(shù)干擾CUL4B的表達后，觀察并分析胃癌細胞中CUL4B的表達變化對胃癌細胞生物學(xué)行為的影響。
　　方法：
　　1.采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測82例胃癌標本的CUL4B表達情況，標本均為經(jīng)病理確診后經(jīng)手術(shù)切除的胃癌組織。免疫組織化學(xué)染色方法結(jié)果采用SPSS16.0軟件進行

2、統(tǒng)計，并分析CUL4B的表達水平與胃癌侵襲性表型的相關(guān)性；
　　2.采用Westernblot檢測胃癌組織及正常組織中CUL4B的表達情況；
　　3.采用Westernblot檢測6株胃癌細胞系和1株正常胃粘膜細胞中CUL4B的表達水平；
　　4.采用siRNA干擾MGC803細胞系中CUL4B的表達，實驗分組分別為：陰性對照組（轉(zhuǎn)染FAM-NC）及干擾組（siRNA-958,siRNA-2247）。轉(zhuǎn)染完成后，采用W

3、esternblot檢測轉(zhuǎn)染前后CUL4B蛋白表達水平的變化及采用qRT-PCR法檢測轉(zhuǎn)染前后CUL4BmRNA表達水平的變化。
　　5.采用Transwell法檢測MGC803細胞在siRNA干擾前后侵襲、遷移能力的變化。
　　6.采用平板克隆法檢測胃癌MGC803細胞在siRNA干擾前后增殖能化。
　　7.采用Westernblot檢測Wnt/β-catenin信號通路蛋白上β-catenin及Cyclin-D1表

4、達水平的變化；
　　結(jié)果：
　　1.CUL4B在胃癌組織中表達上調(diào)：采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測胃癌切除標本中胃癌組織CUL4B的表達情況，結(jié)果顯示CUL4B在78.04％（64/82）病例的腫瘤組織中表達上調(diào)。與臨床資料進行統(tǒng)計學(xué)分析，結(jié)果顯示CUL4B的高表達與胃癌侵襲性表型（高TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管侵犯）相關(guān)（p<0.05）；
　　2.CUL4B在胃癌細胞系中表達上調(diào)：采用Westernbloting檢測的

5、6株胃癌細胞系（分別為AGS、BGC823、MGC803、HGC27、SGC7901、MKN45）和1株正常胃粘膜細胞GES-1中CUL4B的表達情況，發(fā)現(xiàn)CUL4B的表達水平較正常細胞而言，在胃癌細胞中的表達升高，并且,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)；
　　3.Westernblot結(jié)果顯示CUL4B在胃癌組織中的表達水平較正常組織的表達水平明顯上調(diào)，且差異具有統(tǒng)計學(xué)差異（p<0.05）；
　　4.Westernblo

6、t及qRT-PCR檢測轉(zhuǎn)染前后CUL4B蛋白和CUL4BmRNA的表達水平較陰性對照組明顯下調(diào)（p<0.05)；
　　5.Transwell法侵襲遷移實驗結(jié)果顯示：實驗組細胞侵襲及遷移能力較陰性對照組明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；
　　6.細胞平板克隆實驗結(jié)果顯示，實驗組細胞克隆形成能力較陰性對照組明顯減弱，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；
　　7.siRNA轉(zhuǎn)染胃癌MGC803細胞后，Wnt/β-

7、catenin信號通路上β-catenin及Cyclin-D1蛋白表達水平均顯著下降（p<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.CUL4B主要表達于細胞核,且其在胃癌組織中表達上調(diào)。CUL4B的高表達與胃癌侵襲性表型相關(guān)。
　　2.CUL4B在胃癌組織中的表達水平較正常胃組織升高，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.CUL4B在胃癌細胞系中的表達水平普遍升高。
　　4.siRNA干擾胃癌細胞CUL4B的表達后，明顯