ST3GAL6通過調(diào)節(jié)Akt-mTOR信號通路介導miR-26a對肝細胞癌增殖、遷移和侵襲能力的調(diào)節(jié).pdf

1、目的：通過分析比較 ST3GAL6在具有不同侵襲能力的肝癌細胞株MHCC97-H(高侵襲性)和MHCC97-L(低侵襲性)中的表達差異，闡明ST3GAL6與肝細胞癌生物學特征的相關(guān)性以及在肝細胞癌中表達的臨床意義，并深入探討ST3GAL6發(fā)揮作用的主要分子生物學機制，從而為進一步提高肝細胞癌的早期診斷、治療效果及預后提供新的研究策略及方向。
　　方法：
　　(1)應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)在人肝癌高低轉(zhuǎn)移細胞株（MHCC97-H

2、、MHCC97-L）和正常肝細胞（LO2）以及肝癌和癌旁組織中測定ST3GAL6與miR-26a的表達差異，初步探討ST3GAL6與miR-26a在肝癌中的表達及臨床意義。
　　(2)細胞增殖能力通過CCK-8細胞增殖實驗與克隆形成實驗測定，細胞的遷移與侵襲能力分別通過劃痕實驗與細胞侵襲實驗測定。通過建立動物模型來測定miR-26a與ST3GAL6/Akt/mTOR通路對體內(nèi)腫瘤生長速度的作用。
　　(3)應(yīng)用靶基因預測網(wǎng)站

3、對ST3GAL6的上游靶基因進行預測，根據(jù)預測結(jié)果選取差異的miRNAs，通過雙熒光素酶實驗對預測的上游靶基因進行確認。
　　(4)分別上調(diào)和下調(diào)miR-26a與ST3GAL6的表達水平，利用體外、體內(nèi)實驗測定改變前后的肝癌細胞生物學行為的變化，進一步探討miR-26a與ST3GAL6在肝癌發(fā)生發(fā)展中所起的臨床意義。
　　(5)應(yīng)用功能獲得與功能缺失實驗分析miR-26a與ST3GAL6對Akt/mTOR信號通路的調(diào)節(jié)作用，

4、Akt/mTOR信號通路活性的改變通過蛋白免疫印跡實驗來檢測。
　　結(jié)果：
　　(1) ST3GAL6在肝癌組織與細胞系中表達上調(diào)。
　　(2) ST3GAL6調(diào)節(jié)肝癌細胞的增殖、遷移與侵襲能力。
　　(3) miR-26a為ST3GAL6的負向調(diào)節(jié)因子。
　　(4) miR-26a通過靶向調(diào)節(jié)ST3GAL6來調(diào)控肝癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力
　　(5) ST3GAL6介導miR-26a對Akt/m

5、TOR信號通路的調(diào)節(jié)作用。
　　(6) miR-26a通過ST3GAL6/Akt/mTOR通路調(diào)節(jié)小鼠體內(nèi)腫瘤的生長速度。
　　結(jié)論：
　　(1) ST3GAL6在MHCC97-H與MHCC97-L細胞之間以及肝癌組織與正常肝組織之間表達水平存在差別，改變ST3GAL6的表達量能夠顯著改變肝細胞癌的增殖與轉(zhuǎn)移能力。
　　(2) ST3GAL6通過調(diào)控下游Akt/mTOR信號通路介導miR-26a對肝細胞癌的增殖、