鼻咽癌EBV-LMP1通過(guò)AKT-mTOR信號(hào)通路調(diào)控WWOX表達(dá)的初步研究.pdf

1、目的:
　　本課題組前期研究首次發(fā)現(xiàn)，抑癌基因WWOX在鼻咽癌組織中表達(dá)降低，且隨患者病情進(jìn)展而逐步下降，并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示抑癌基因WWOX與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。鼻咽癌與EB病毒(EBV)感染密切相關(guān)，而AKT/mTOR信號(hào)通路被視為癌細(xì)胞存活的首要通路，本研究以EBV的主要致癌基因LMP1為切入點(diǎn)，初步探討EBV主要致癌基因LMP1是否通過(guò)AKT/mTOR信號(hào)通路調(diào)控抑癌基因WWOX的表達(dá)。
　　方法:
　　

2、1.LMP分別與AKT/mTOR通路、抑癌基因WWOX關(guān)系的研究
　　應(yīng)用Westem blot、qPCR檢測(cè)鼻咽癌細(xì)胞株CNE1和CNE1-LMP1AKT/mTOR通路(Akt、p-Akt、p70S6K和p-p70S6K)以及WWOX的表達(dá)情況，探討LMP1與AKT/mTOR通路和WWOX的關(guān)系。
　　2.初步驗(yàn)證LMP1通過(guò)AKT/mTOR通路調(diào)控WWOX表達(dá)的研究
　　以AKT/mTOR信號(hào)通路靶向抑制劑（雷帕霉

3、素）抑制CNE1-LMP1細(xì)胞株，Western blot、qPCR檢測(cè)抑制前后AKT/mTOR通路重要表達(dá)蛋白(Akt、p-Akt、p70S6K和p-p70S6K)、WWOX的表達(dá)情況，初步驗(yàn)證LMP1通過(guò)AKT/mTOR通路調(diào)控WWOX表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.LMP分別與AKT/mTOR通路、抑癌基因WWOX關(guān)系的研究
　　LMP1與WWOX基因mRNA、蛋白表達(dá)情況的研究:在CNE1-LMP1細(xì)胞中，WWOX

4、基因mRNA、蛋白的表達(dá)水平較CNE1細(xì)胞均下降，P分別為0.025，0.002，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示LMP1與WWOX表達(dá)相關(guān)。
　　LMP1與AKT/mTOR信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白表達(dá)情況的研究:在鼻咽癌細(xì)胞株CNE1與CNE1-LMP1的比較中，AKT/mTOR通路中關(guān)鍵蛋白Akt、p-Akt、p70S6K和p-p70S6K表達(dá)的各P值分別為0.075，0.008，0.124，0.034，其中Akt、p70S6K在CNE1與CNE1

5、-LMP1中的蛋白差異表達(dá)不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而p-Akt、p-p70S6K在CNE1-LMP1中表達(dá)水平高于CNE1，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示AKT/mTOR信號(hào)通路受LMP1調(diào)控。
　　2.初步驗(yàn)證LMP1通過(guò)AKT/mTOR通路調(diào)控WWOX表達(dá)的研究
　　使用通路靶向抑制劑（雷帕霉素）抑制CNE1-LMP1細(xì)胞株后，WWOX基因mRNA、蛋白的表達(dá)水平均升高，P值分別為0.036，0.044，提示AKT/mTOR信號(hào)通路

6、調(diào)控WWOX基因表達(dá)。另外，AKT/mTOR信號(hào)通路的關(guān)鍵蛋白Akt、p-Akt、p70S6K和p-p70S6K在藥物抑制處理前后的差異表達(dá)中，各P值分別為0.136，0.354，0.103，0.045，其中Akt、p-Akt、p70S6K在抑制處理前后的蛋白差異表達(dá)不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，p-Akt作為雷帕霉素作用靶點(diǎn)的上游，用藥以后表達(dá)亦不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而p-p70S6K在抑制處理CNE1-LMP1細(xì)胞以后的表達(dá)水平低于用藥處理前，且差