鼻咽癌EBV-LMP1通過(guò)NF-κB信號(hào)通路調(diào)控WWOX表達(dá)的初步研究.pdf

1、目的：鼻咽癌是我國(guó)高發(fā)腫瘤之一，廣東、廣西、湖南、福建等省為高發(fā)區(qū)，起病隱匿，預(yù)后差。我們課題組前期研究首次發(fā)現(xiàn)，抑癌基因WWOX在鼻咽癌組織中表達(dá)降低，且隨著癌癥發(fā)生發(fā)展而逐步下降，并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示抑癌基因WWOX與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。EB病毒一種人類皰疹病毒，EB病毒致瘤蛋白LMP1可激活NF-κB信號(hào)通路，且WWOX又是該通路負(fù)向調(diào)控的靶點(diǎn)，故本研究以EBV的主要致瘤因子LMP1為切入點(diǎn)，初步探討EBV主要致瘤基因LMP

2、1是否通過(guò)NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)控抑癌基因WWOX的表達(dá)。
　　方法：⑴LMP1分別與抑癌基因WWOX、NF-κB通路關(guān)系的研究應(yīng)用Western blot、qPCR檢測(cè)鼻咽癌細(xì)胞株CNE1和轉(zhuǎn)染株CNE1-LMP1中NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路關(guān)鍵因子（IκBα，p100/p52，p-IκBα，p-p100/p52）以及WWOX的表達(dá)情況，探討LMP1與NF-κB通路和WWOX的關(guān)系。⑵探討LMP1是否通過(guò)NF-κB通路調(diào)控WWOX

3、表達(dá)的研究用NF-κB信號(hào)通路抑制劑（MG132）處理CNE1-LMP1細(xì)胞株，Western blot檢測(cè)處理前后NF-κB通路關(guān)鍵表達(dá)蛋白（IκBα，p100/p52，p-IκBα，p- p100/p52）和WWOX基因的蛋白表達(dá)，初步探討LMP1是否通過(guò)NF-κB信號(hào)通路抑制WWOX的表達(dá)。
　　結(jié)果：①WWOX基因在CNE1-LMP1細(xì)胞中mRNA和蛋白表達(dá)情況的研究：qPCR和WB結(jié)果顯示，WWOX基因mRNA和蛋白在C

4、NE1-LMP1細(xì)胞中的表達(dá)水平均比CNE1細(xì)胞中的低，P值分別為0.047、0.003，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示LMP1與WWOX表達(dá)相關(guān)。NF-κB信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白在CNE1-LMP1細(xì)胞中表達(dá)情況的研究：在鼻咽癌細(xì)胞株CNE1與CNE1-LMP1的比較中，NF-κB通路中關(guān)鍵蛋白IκBα，p-IκBα，p100/p52，p-p100/p52表達(dá)的各P值分別為0.06、0.012、0.083、0.038，其中IκBα、p100/p52

5、在CNE1與CNE1-LMP1中的蛋白差異表達(dá)不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而p-IκBα，p-p100/p52在CNE1-LMP1中表達(dá)水平高于CNE1，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示NF-κB信號(hào)通路受LMP1調(diào)控。②使用通路靶向抑制劑（MG132）處理CNE1-LMP1細(xì)胞株后，WWOX蛋白的表達(dá)水平升高，P值分別為0.043，提示W(wǎng)WOX基因表達(dá)受NF-κB信號(hào)通路調(diào)控。另外，NF-κB信號(hào)通路的關(guān)鍵蛋白IκBα，p-IκBα，p100/p52，

6、p-p100/p52在抑制劑處理前后的差異表達(dá)中，各P值分別為0.065、0.008、0.072、0.006，其中IκBα、p100/p52在藥物處理前后的蛋白差異表達(dá)不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而抑制劑處理CNE1-LMP1細(xì)胞以后，磷酸化蛋白p-IκBα，p-p100/p52的表達(dá)水平低于用藥處理前，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)意義，說(shuō)明抑制劑MG132有效抑制了NF-κB通路的激活。
　　結(jié)論：⑴與轉(zhuǎn)染前的CNE1細(xì)胞株相比，轉(zhuǎn)染細(xì)胞株CNE1-