人類前列腺癌中microRNA-497通過(guò)靶基因IKKβ調(diào)控NF-κB信號(hào)通路功能機(jī)制研究.pdf

1、目的：前列腺癌（PCa）是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，前列腺癌相關(guān)死亡的主要原因是出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的概率高。微小 RNA（microRNA）通過(guò)調(diào)節(jié)它們的靶基因，在癌癥發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中起重要作用。本研究的目的是探討人類前列腺癌細(xì)胞中 miR-497通過(guò)靶基因 NF-κ B（Iκ Bs）抑制激酶β（IKKβ）調(diào)控 NF-κ B信號(hào)傳導(dǎo)途徑的功能機(jī)制，以此驗(yàn)證miR-497/IKKβ/NF-κ B靶點(diǎn)在前列腺癌診療中的潛在應(yīng)用價(jià)值。
　　方法：實(shí)

2、時(shí)RT-PCR用于檢測(cè)臨床收集的40對(duì)前列腺癌患者和健康對(duì)照受試者的血清樣品，以測(cè)定miR-497的表達(dá)水平。分子生物學(xué)功能實(shí)驗(yàn)，采用細(xì)胞增殖試驗(yàn)，細(xì)胞流式周期檢測(cè)，以及遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)轉(zhuǎn)染miR-497和anti-miR-497，沉默 IKKβ，應(yīng)用IMD-0354（一種新型的IKKβ抑制劑）后的影響。我們使用了三種生物信息學(xué)網(wǎng)站預(yù)測(cè)方法，并采用熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)和 Western blo t分析證實(shí) IK Kβ是 miR-49

3、7直接調(diào)控的靶基因。在轉(zhuǎn)染miR-497和anti-miR-497，沉默IKKβ，應(yīng)用IMD-0354后，使用Western blot以檢測(cè)CDK8、MMP9、PSA的表達(dá)的情況。
　　結(jié)果：在我們的實(shí)驗(yàn)中，與來(lái)自健康對(duì)照受試者的樣品相比較，實(shí)時(shí)RT-PCR結(jié)果分析顯示miR-497的表達(dá)水平在前列腺癌血清樣品中明顯下調(diào)。功能實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞增殖CCK-8實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，miR-497轉(zhuǎn)染后能夠分別在48和72小時(shí)顯著抑制PC3-AR細(xì)胞的

4、增殖能力。相反，在PC3-AR細(xì)胞中anti-miR-497的轉(zhuǎn)染可以促進(jìn)細(xì)胞增殖。細(xì)胞流式周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染miR-49724和48小時(shí)后，分別導(dǎo)致 PC3-AR細(xì)胞在 S和 G0/G1細(xì)胞周期的細(xì)胞數(shù)增加。與此相反，anti-miR-497轉(zhuǎn)染后則有S和G0/G1細(xì)胞周期的細(xì)胞數(shù)減少的效果。Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)顯示，相對(duì)于對(duì)照組細(xì)胞，miR-497轉(zhuǎn)染后能夠?qū)е翽C3-AR細(xì)胞的遷移、侵襲能力下降。隨后，IKKβ被確認(rèn)為

5、的miR-497靶基因。此外，IKKβ沉默后也能夠?qū)е翽C3-AR細(xì)胞增殖活性下降，細(xì)胞遷移和侵襲能力降低。最后，在PC3-AR細(xì)胞中應(yīng)用一種新型的IKKβ抑制劑（IMD-0354）治療后，也得到了類似的細(xì)胞增殖、流式周期，細(xì)胞遷移和侵襲變化的結(jié)果。CDK8、MMP9、和PSA被證實(shí)參與這些過(guò)程之中。
　　結(jié)論：miR-497在人類前列腺腫瘤組織和血液樣品中一致性的表達(dá)降低，使得它們作為前列腺癌進(jìn)展的標(biāo)記物成為可能。此外，考慮mi

6、R-497，siR-IKKβ和 IMD-0354對(duì)細(xì)胞的增殖，遷移和侵襲的抑制作用，可以斷定了 miR-497在人前列腺癌的發(fā)生和發(fā)展中通過(guò)靶向調(diào)節(jié)IKKβ參與介導(dǎo)NF-κ B/MMP9/PSA信號(hào)通路。因此，miR-497可能成為一個(gè)新的診斷標(biāo)志物，以部分取代或成為PSA在前列腺癌檢測(cè)中的補(bǔ)充。總之，這些結(jié)果表明，靶向的miR-497/IKKβ/NF-κ B相互作用或調(diào)控 miR-497的表達(dá)可能成為前列腺癌患者預(yù)防、診斷和治療的一個(gè)