以FKBP51為靶點的小分子抑制前列腺癌AR信號通路.pdf

1、分類號： 分類號： 密級： 密級： 研 究 生 學(xué) 位 論 文 校址：甘肅省蘭州市 校址：甘肅省蘭州市 論文題目（中文） 論文題目（中文） 以 FKBP51 為靶點的小分子抑制前列 為靶點的小分子抑制前列腺癌 腺癌 AR 信號通路 信號通路 論文題目（外文） 論文題目（外文） The small molecules targe

2、ted for protein FKBP51 inhibit the androgen receptor-signaling pathway in prostate cancer 研 究 生 姓 名 研 究 生 姓 名 武丹 武丹 學(xué) 科 、 專 業(yè) 學(xué) 科 、 專 業(yè) 生物學(xué)·細(xì)胞生物學(xué) 細(xì)胞生物學(xué) 研 究 方 向 研 究 方 向 前列腺癌信號通路 前列腺癌信號通路 學(xué) 位 級 別 學(xué) 位 級 別 博 士 導(dǎo) 師

3、姓 名 、 職 稱 導(dǎo) 師 姓 名 、 職 稱 王志平 王志平 教授 教授 論 文 工 作 論 文 工 作 起 止 年 月 起 止 年 月 2014 年 7 月至 月至 2017 年 1 月 論 文 提 交 日 期 論 文 提 交 日 期 2017 年 4 月 論 文 答 辯 日 期 論 文 答 辯 日 期 2017 年 5 月 學(xué) 位 授 予 日 期 學(xué) 位 授 予 日 期 2017 年 6 月 I 以 FKB

4、P51 FKBP51 為靶點的小分子抑制前列腺癌 為靶點的小分子抑制前列腺癌 AR AR 信號通路 信號通路 中文摘要 中文摘要 目的:前列腺癌(PCa) 是男性癌癥最常見的惡性腫瘤之一。對于晚期患者除了手術(shù)治療以外,常常使用抗雄藥物作為輔助治療。這些抗雄藥物多是靶向于雄激素受體(AR),競爭性地與雄激素結(jié)合在活性位點,阻礙 AR 信號通路并且抑制前列腺癌細(xì)胞的生長,但這些藥物的治療效果卻未令人滿意。隨著結(jié)構(gòu)生物學(xué)的發(fā)展,腫瘤的藥物開發(fā)

5、越來越多依賴關(guān)鍵靶蛋白的結(jié)構(gòu),成為腫瘤藥物開發(fā)的主要方法。有研究報道在前列腺癌細(xì)胞中,FKBP51 是 AR 的正調(diào)控因子,通過抑制 FKBP51 的活性能夠有效抑制 AR 的轉(zhuǎn)錄活性,降低 AR 的信號通路。本課題以 FKBP51 為主要靶點,通過虛擬方法篩選方法,篩選出小分子抑制劑,抑制 PCa 細(xì)胞的生長。同時,前人報道小分子-對硝基酚(環(huán)境內(nèi)分泌干擾物)具有抗雄活性,它的抗雄機制是復(fù)雜的,可能涉及了 AR 信號通路多個成分,但它

6、是怎樣抑制 AR 活性的并不知道。另外,雷帕霉素(rapamycin)是 FKBP51 已知的小分子抑制劑,但它對 AR 信號通路的影響是未知的,因此,我們研究是否它對 AR 信號通路的作用,以及是否通過 FKBP51 蛋白介導(dǎo)。本實驗將 FKBP51 作為篩藥的靶向蛋白和分子抗雄作用的關(guān)鍵蛋白,旨在研究FKBP51 在前列腺癌信號通路中的作用,并進(jìn)一步探討小分子藥物或者污染物通過 FKBP51 作用的可能的抗雄機制,為 PCa 及 C

7、RPC 的治療提供一種新的治療策略,尤其對于雄激素抵抗型前列腺癌的藥物設(shè)計及臨床治療提供了一定的理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。 方法:計算機虛擬篩選靶向 FKBP51 的小分子抑制劑,根據(jù)打分選擇前 140名的虛擬篩選小分子抑制劑;構(gòu)建 FK1-PET-28a 質(zhì)粒,通過大腸桿菌誘導(dǎo)表達(dá)并純化 FKBP51 的 FK1 區(qū)域;通過蛋白質(zhì)熒光淬滅實驗-酶標(biāo)法高通量檢測蛋白質(zhì)與虛擬篩選小分子的相互作用,并用熒光滴定法測結(jié)合較好的小分子的結(jié)合常數(shù)。不同

8、溫度下通過蛋白質(zhì)熒光淬滅實驗-分光光度法檢測小分子(對硝基酚、rapamycin)與 FKBP51 的相互作用;將小分子與蛋白質(zhì)共結(jié)晶,通過分子結(jié)構(gòu)學(xué)方法 X-晶體衍射分析小分子與蛋白質(zhì)結(jié)合復(fù)合物的結(jié)構(gòu),分析它們結(jié)合的特征等;通過分子動力學(xué)方法檢測分子小分子與蛋白結(jié)合的復(fù)合物的穩(wěn)定性;采用 MTT 比色法檢測小分子對前列腺細(xì)胞生長與增殖的影響;利用qRT-PCR 檢測小分子對 AR 所調(diào)控的下游基因 mRNA 水平的影響;通過 West