血管生成素-1通過NF-κB傳導通路調節(jié)內皮祖細胞炎癥狀態(tài)的研究.pdf

1、內皮損傷和炎癥是動脈粥樣硬化的主要特點。修復內皮細胞功能已成為防治動脈粥樣硬化的靶點。我們在前期研究中發(fā)現(xiàn)：誘導大鼠的內皮祖細胞(endothelial progenitor cells，EPCs)炎癥時，經(jīng)下調EPC中ABIN-2蛋白的表達，Ang-1對炎癥反應的抑制作用消失。ABIN-2蛋白是NF-kB內源性抑制物，能夠抑制NF-kB的活性，而在調節(jié)炎癥反應的信號通路中，NF-kB信號途徑被認為是經(jīng)典的一條途徑。那么Ang-1調節(jié)炎

2、癥反應是否通過抑制NF-kB發(fā)揮作用?為此，我們使用NF-kB特異性抑制劑抑制其活性，通過觀察NF-kB失活后Ang-1對炎癥反應的作用，論證NF-kB信號傳導通路在Ang-1干預內皮祖細胞炎癥反應中的作用。
　　 實驗采用TNF-a誘導EPC炎癥反應，以慢病毒為載體將Ang-1導入EPCs中，使用特異性抑制劑PDTC抑制NF-κB，通過Western blotting檢測EPC細胞中Ang-1蛋白和NF-kB蛋白的表達情況。隨

3、后采用熒光定量PCR、ELISA方法檢測各組EPC細胞中粘附分子ICAM-1、VCAM-1的表達水平。
　　 實驗結果提示：轉染Ang-1基因EPC細胞中能夠成功表達Ang-1蛋白，而經(jīng)PDTC抑制后NF-κB蛋白未見明顯表達。熒光定量PCR、ELISA證實在mRNA水平和蛋白水平上PDTC處理后可明顯抑制TNF-a誘導的ICAM-1和VCAM-1的表達，攜帶Ang-1基因的慢病毒組也出現(xiàn)同樣結果。而經(jīng)PDTC處理后，Ang-1