血管生成素-1基因修飾內(nèi)皮祖細胞移植在損傷血管內(nèi)皮修復(fù)中的作用研究.pdf

1、目的：體外培養(yǎng)大鼠血管生成素-1(Angiopoeitin-1，Ang-1)基因修飾內(nèi)皮祖細胞(endothelial progenitor cell，EPC)，即(Ang-1-EPCs)。構(gòu)建股動脈球囊損傷的大鼠模型。探討Ang-1基因修飾的EPCs對大鼠急性球囊損傷動脈血管的修復(fù)作用。
　　 方法：大鼠股動脈經(jīng)球囊損傷后2天，掃描電鏡觀察其內(nèi)皮損傷情況。動物實驗分三組：對照組、單純損傷組、細胞移植組；細胞移植組包括EPCs移

2、植組(n=16)，PNL-EPCs移植組(n=16)及Angl-EPCs移植組(n=16)。通過血管外膜下直接注射移植基因修飾的EPCs。2周時處死部分動物取出股動脈組織并收集外周血，流式細胞技術(shù)測定CD34陽性細胞比例，評價其骨髓動員的程度。ELISA檢測各組血清Ang-1的含量，HE染色檢測各組動脈內(nèi)膜/中層比差別，PCNA免疫組化觀察平滑肌細胞增殖效應(yīng)，Real-Time PCR定量分析股動脈組織中Ang-1/Tie-2的mRNA

3、含量；4周時取股動脈組織，熒光顯微鏡觀察EGFP(+)細胞，Ⅷ因子免疫熒光觀察Ang-1-EPCs的分化情況。
　　 結(jié)果：
　　 1．大鼠股動脈球囊損傷模型建立：經(jīng)球囊損傷后，掃描電鏡觀察有明顯內(nèi)皮剝脫。在單純球囊損傷組，2周石臘切片HE染色見明顯的新生內(nèi)膜增殖，血管腔明顯變狹窄。PCNA組化染色發(fā)現(xiàn)中膜和新生內(nèi)膜有較多PCNA陽性細胞；
　　 2．基因修飾EPCs移植對新生內(nèi)膜的增生程度的影響：經(jīng)EPC移植干

4、預(yù)后，中膜和新生內(nèi)膜中PCNA陽性細胞比例減低，其中Ang-1-EPCs減低最明顯，提示Ang-1修飾的EPCs移植干預(yù)有抑制大鼠球囊損傷血管后新生內(nèi)膜增殖的效果；
　　 3．基因修飾EPCs移植對損傷血管內(nèi)皮修復(fù)的作用：Ang-1-EPCs明顯上調(diào)外周血中CD34陽性細胞比例(P＜0.05)及Ang-1含量(P＜0.05)；且Ang-1-EPCs移植組股動脈組織中Ang-1的mRNA含量也明顯上升：4周時，Ⅷ因子免疫熒光提示E