核靶向性石墨烯藥物載體在抑制脈絡(luò)膜黑色素瘤上的應(yīng)用.pdf

1、實驗?zāi)康模?br>　　使用邊緣功能化球磨法一步制備生物分子（多肽）修飾的石墨烯（TG）納米材料，以傳統(tǒng)化療藥物絲裂霉素 C（MMC）為模型，針對眼部惡性腫瘤—脈絡(luò)膜黑色素瘤，構(gòu)建對腫瘤具有高度核靶向性的新型納米載藥體系多肽石墨烯（TG-MMC）。以實現(xiàn)將抗腫瘤藥物直接遞送至腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)，達到選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞的目的，從而有效改善傳統(tǒng)化療藥物無靶向性、副作用大的缺陷。
　　實驗方法：
　　通過邊緣功能化球磨法將TAT多肽

2、和石墨粉以一定的比例混合球磨，一步制備獲得多肽石墨烯；通過酰胺共價鍵接載絲裂霉素C，構(gòu)建TG-MMC納米載藥體系。采用紫外光譜、傅里葉紅外光譜、拉曼光譜、原子力顯微鏡等多種表征技術(shù)確認(rèn) TG-MMC的成功合成。將 TG-MMC與正常眼細(xì)胞系（ARPE-19）和腫瘤細(xì)胞系（OCM-1）共培養(yǎng)，檢測納米載藥體系對腫瘤細(xì)胞的靶向性和殺傷性。通過透射電子顯微鏡（TEM）和共聚焦顯微鏡（CLSM）進一步確認(rèn)所制備的納米材料TG對腫瘤細(xì)胞具有較明顯

3、的核靶向性。
　　實驗結(jié)果：
　　1)材料表征：原子力顯微鏡、掃描電子顯微鏡等表征手段證明一步法球磨獲得平均厚度約為0.7 nm的單層片狀石墨烯，并可見邊緣被TAT多肽分子功能化；拉曼光譜顯示產(chǎn)物具有TAT多肽的特征峰，且具有石墨烯明顯的特征峰D峰（1362cm-1）G峰（1609cm-1）和2D峰（2708cm-1）。從紫外光譜、紅外光譜等表征結(jié)果證實 TG-MMC體系構(gòu)建成功，并計算得到 TG-MMC中MMC的載藥率為2

4、1.6％，包封率為54.8%。
　　2)細(xì)胞毒性測試：采用CCK-8法檢測了所制備的TG對于視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞（ARPE-19）的細(xì)胞毒性，50μg/ml濃度的材料作用于細(xì)胞72小時，細(xì)胞存活率達90%以上，顯示了TG良好的生物相容性，為TG作為納米載藥體系的制備提供了保障。
　　3)核靶向性檢測：分別用含有TG的培養(yǎng)液培養(yǎng)ARPE-19細(xì)胞和OCM-1細(xì)胞，在不同時間點洗去材料，固定細(xì)胞后分別用 TEM和共聚焦顯微鏡觀察，

5、發(fā)現(xiàn)納米材料可以在6h后分布于正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞內(nèi)，并且在36h后開始代謝。在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)也發(fā)現(xiàn)有納米材料分布，但是并未在正常細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)發(fā)現(xiàn)納米材料，說明TG材料具有對腫瘤細(xì)胞的特異核靶向性。
　　4) Transwell共培養(yǎng)：分別用不同濃度的TG-MMC對ARPE-19細(xì)胞和OCM-1細(xì)胞進行共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)不同時間點載藥體系對腫瘤細(xì)胞的殺傷性都遠遠大于正常細(xì)胞；對照組采用單純的MMC抗腫瘤藥物共培養(yǎng)兩種細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)藥物并

6、沒有靶向性，在相同濃度下對ARPE-19細(xì)胞和OCM-1的殺傷性基本相同，表明TG的存在，是載藥體系具有腫瘤細(xì)胞靶向性的決定因素。
　　實驗結(jié)論：
　　本論文以邊緣功能化球磨法制備獲得了原子厚度的多肽石墨烯，簡化了石墨烯的制備及相應(yīng)的生物分子改性過程，將石墨烯的剝離、生物分子的改性、及腫瘤高靶向性等多個繁瑣過程簡化為高效簡便的一步法。同時所有反應(yīng)均在常溫常壓下進行，沒有使用任何的有毒化學(xué)試劑，相較傳統(tǒng)方式更為環(huán)保高效，所得產(chǎn)