高血壓腎交感神經(jīng)的病理三維重建及組織學(xué)和功能學(xué)重塑研究.pdf

1、第一部分、二維層面高血壓犬腎交感神經(jīng)的組織學(xué)和功能學(xué)重塑研究
　　目的：在二維層面運用常規(guī)病理切片評估高血壓犬腎交感神經(jīng)（Renal sympathetic nerve,RSN）是否存在組織學(xué)和功能學(xué)重塑。
　　方法：對老年昆明犬進行有創(chuàng)血壓測量，根據(jù)血壓測量結(jié)果將其分為高血壓犬組（n=7）和非高血壓犬組（n=7）。將左側(cè)腎動脈平均分為近、中、遠3段行HE染色、酪氨酸羥化酶（tyrosine hydroxylase,TH）和

2、P物質(zhì)免疫組織化學(xué)染色。取左側(cè)主動脈腎神經(jīng)節(jié)行HE染色、TH和生長因子相關(guān)蛋白43（Growth associated protein43,GAP43）免疫組織化學(xué)染色。取新鮮腎臟組織行高效液相色譜（High performance liquid chromatography,HPLC）分析，測量腎組織去甲腎上腺素濃度（norepinephrine,NE）。
　　結(jié)果：高血壓組的平均血壓（175.7±8.5/116.0±9.1mm

3、Hg）顯著高于非高血壓組（124.1±9.8/85.4±5.1mmHg,P＜0.01）。高血壓組與非高血壓組相比，腎動脈近段的RSN數(shù)目（P=0.042）顯著增多，但在腎動脈中段（P=0.417）和遠段（P=0.641）二者無顯著差異。腎動脈各節(jié)段RSN的大小和距腎動脈內(nèi)膜距離在兩組間均無統(tǒng)計學(xué)差異。高血壓組TH（P=0.025）和P物質(zhì)（P＜0.01）的平均密度以及腎組織NE濃度（P=0.027）均顯著高于非高血壓組。主動脈腎神經(jīng)節(jié)神

4、經(jīng)元的平均面積在高血壓組要顯著高于非高血壓組（P=0.023），但兩組每個高倍視野下的平均神經(jīng)元數(shù)目相當(dāng)（P=0.21）。高血壓時神經(jīng)元GAP43表達顯著增強（P=0.012），TH的表達也略高于非高血壓組，但并無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.156）。
　　結(jié)論：高血壓時主動脈腎神經(jīng)節(jié)可能存在組織學(xué)和功能學(xué)重塑，且RSN傳入和傳神經(jīng)纖維的功能也有不同程度增強。但在高血壓時RSN是否存在組織學(xué)重塑還需在三維層面進一步研究。
　　第二部

5、分、高血壓與非高血壓犬腎交感神經(jīng)的病理三維重建
　　目的：利用病理三維重建技術(shù)（Pathological three-dimensional reconstruction,PTDR）三維重建犬腎交感神經(jīng)（Renal sympathetic nerve,RSN），在三維層面分析RSN的解剖學(xué)特征并進一步明確高血壓犬的RSN是否存在組織學(xué)重塑。
　　方法：取犬右側(cè)腎動脈（存在副腎動脈時取左側(cè)）并以女性發(fā)絲作為定位標識，對腎動脈及

6、其周圍組織行間斷連續(xù)冰凍切片和HE染色。利用高清掃描儀獲取切片病理圖像，并利用Photoshop軟件根據(jù)定位標識進行圖像匹配。將所有匹配圖像導(dǎo)入3D-doctor軟件，根據(jù)圖像大小設(shè)置三維重建參數(shù)，對不同組織進行輪廓分割，最終采用Complex surface模式重建犬RSN的三維圖像。利用3D-doctor軟件將圖像平均分為近段、中段和遠段三個部分，自動計算腎動脈、RSN的體積等參數(shù)，手動完成RSN的計數(shù)和距離測量。
　　結(jié)果：

7、利用3D-doctor軟件成功重建出犬RSN的三維圖像。犬的RSN多呈單根形態(tài)從腎動脈上極發(fā)出，纏繞腎動脈并與其伴行至腎動脈遠端入腎。犬腎動脈近段RSN的體積要大于中段（P＜0.01）和遠段（P＜0.01）。RSN在上極（P＜0.01）的數(shù)目多于下極、腹側(cè)和背側(cè)，但近、中、遠3段的RSN數(shù)目無顯著差異（P=0.816）。RSN從腎動脈近段行進至中段和遠段的過程中距腎血管內(nèi)膜的距離逐漸減?。≒＜0.01）?？傮w上，高血壓犬RSN的數(shù)目要多

8、于非高血壓犬（P=0.02）。但在RSN距腎動脈內(nèi)膜距離（P=0.054），RSN平均體積（P=0.12）和RSN/腎動脈體積比（P=0.44）方面，二者并無顯著差異。
　　結(jié)論：本部分研究首次利用PTDR技術(shù)重建出犬RSN的三維圖像，并在三維層面對犬RSN的解剖學(xué)特征進行了較為詳盡的描述。此外，我們發(fā)現(xiàn)高血壓犬RSN的數(shù)目多于非高血壓犬，提示高血壓可能導(dǎo)致RSN的組織學(xué)重塑。
　　第三部分、人體腎交感神經(jīng)的病理三維重建及組

9、織學(xué)和功能學(xué)重塑
　　目的：三維重建人體腎交感神經(jīng)（Renal sympathetic nerve,RSN），評估其三維解剖分布特征；比較高血壓和非高血壓人群RSN和腎神經(jīng)節(jié)（Renal ganglion,RG）的三維圖像和免疫組化特征，明確高血壓時人體RSN和RG是否存在組織學(xué)和功能學(xué)重塑。
　　方法：收集新鮮人體腎動脈標本進行間斷連續(xù)冰凍切片，利用病理三維重建技術(shù)重建人體腎交感神經(jīng)（Renal sympathetic n

10、erve,RSN）。測量RSN體積、RG體積、RSN和腎動脈體積比、RG和腎動脈體積比、RSN距腎動脈內(nèi)膜最大距離、RSN距腎動脈內(nèi)膜最小距離。對人體RSN冰凍切片行酪氨酸羥化酶（tyrosine hydroxylase,TH）和P物質(zhì)免疫組化染色。對人體RG冰凍切片行TH和生長因子相關(guān)蛋白43（Growth associated protein43,GAP43）免疫組化染色。收集患者病史資料，比較高血壓與非高血壓人群上述參數(shù)是否存在差

11、異。
　　結(jié)果：本部分研究納入7例尸檢病例（高血壓4例，非高血壓3例）共11條腎動脈（左側(cè)5條，右側(cè)6條）。三維圖像顯示人體RSN在腎動脈周圍呈網(wǎng)狀分布。腎動脈近段 RSN平均體積和 RSN/腎動脈體積比要大于中段和遠段。腎動脈近段和中段的RG體積以及RG/腎動脈體積比顯著大于遠段。人體RSN從腎動脈近段行至遠段的過程中，距腎動脈內(nèi)膜的距離逐漸減小。高血壓患者RSN體積與非高血壓患者相當(dāng)（P=0.072），但二者RSN/腎動脈體積

12、比存在顯著差異（P=0.01）。RG體積（P=0.029）和RG/腎動脈體積比（P=0.045）在高血壓患者顯著增大。RSN TH的平均密度在高血壓組要顯著高于非高血壓組（P＜0.01），但 P物質(zhì)的平均密度在兩組并無顯著差異（P=0.80）。此外，RG平均神經(jīng)元面積（P＜0.01）和GAP43的表達（P＜0.01）在高血壓人群中也顯著增加。
　　結(jié)論：腎動脈近段RSN和RG的體積較大，但離腎動脈距離較遠；雖然遠段RSN體積較小，