乳蛋白及鹿茸蛋白消化組學(xué)的研究.pdf

1、食物蛋白質(zhì)消化組學(xué)是利用以質(zhì)譜技術(shù)為核心的蛋白質(zhì)組學(xué)方法，研究食源性蛋白質(zhì)經(jīng)過人體胃腸道消化后肽的變化以及降解產(chǎn)物對(duì)人體健康的影響，是目前國(guó)際上一個(gè)活躍的研究領(lǐng)域。本論文建立了一種基于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（Liquid Chromatograph-tandem Mass Spectrometry,LC-MS/MS）技術(shù)的模擬人體胃腸道消化的蛋白質(zhì)消化組學(xué)研究模型，研究酸奶、牛奶以及鹿茸等食源性蛋白質(zhì)在模擬胃腸道消化過程中的肽譜及生物活性，并

2、結(jié)合構(gòu)效關(guān)系篩選潛在的生物活性肽。
　　本論文的工作主要分為三個(gè)部分：
　　1.酸奶消化組學(xué)的研究。利用食物蛋白質(zhì)消化組學(xué)模型研究了酸奶及其消化物中肽譜和生物活性。利用LC-MS/MS技術(shù)在酸奶、酸奶胃消化產(chǎn)物和酸奶胰消化產(chǎn)物中分別鑒定到250、434和466條酪蛋白肽，其中三個(gè)樣品的共同肽段有40條。以對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）和二肽基肽酶IV（Dipeptid

3、yl Peptidase IV,DPP-IV）的抑制能力為指標(biāo)，評(píng)價(jià)酸奶及其消化物的生物活性。樣品濃度為0.1mg/mL時(shí)，三種樣品的ACE抑制率分別為14.15％、23.78%和52.71%；樣品濃度為2.5mg/mL時(shí)，三種樣品DPP-IV抑制率分別為8.94%，21.19%和63.34%。篩選發(fā)現(xiàn)新的活性肽FVAPFPEVF、PPFLQPEVM和QEPVLGPVRGPFPIIV，其中PPFLQPEVM具有最好的ACE和DPP-IV

4、抑制活性，IC50分別為0.037和0.464mg/mL。結(jié)果表明在消化過程中酸奶中大量的肽段被逐漸釋放，消化產(chǎn)物的生物活性也逐漸增強(qiáng)。
　　2.牛奶酪蛋白消化組學(xué)的研究。利用食物蛋白質(zhì)消化組學(xué)模型研究了牛奶及其消化物中酪蛋白磷酸肽（Caseinophosphopeptides,CPPs）的變化規(guī)律。利用固定化Ti4+親和色譜微球（Ti4+-IMAC）材料富集牛奶、牛奶胃消化產(chǎn)物和牛奶胰消化產(chǎn)物中的CPPs。利用LC-MS/MS方

5、法從牛奶、牛奶胃消化和牛奶胰消化產(chǎn)物中分別鑒定到65、73和124條CPPs，大多數(shù)是單磷酸化肽。三個(gè)樣品中共鑒定到4條共同肽段，分別為VPQLEIVPNSpAEER，F(xiàn)QSpEEQQQTEDELQDK、IEKFQSpEEQQQTEDELQDK、和RELEELNVPGEIVESpL，為內(nèi)源性耐酶解CPPs。肽譜分析表明牛奶中的CPPs是由內(nèi)源性蛋白酶胞漿素作用產(chǎn)生的內(nèi)源性肽。在牛奶及牛奶消化產(chǎn)物中共鑒定到25條具有SpSpSpEE結(jié)構(gòu)的

6、CPPs和32條含磷酸蘇氨酸殘基的CPPs，提高了CPPs的多樣性。同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)具有SpSpSpEE序列結(jié)構(gòu)的CPPs并不能抵抗消化酶的作用。
　　3.鹿茸蛋白消化組學(xué)的研究。利用食物蛋白質(zhì)消化組學(xué)模型研究了鹿茸水提物（AAE）及其消化物的肽譜，并以其對(duì)DPP-IV和脯氨酰內(nèi)切酶（Prolyl Endopeptidase，PEP）的抑制能力為指標(biāo)評(píng)價(jià)生物活性。AAE、鹿茸水提物胃消化產(chǎn)物（GDAAE）和胰消化產(chǎn)物（PDAAE）分別

7、鑒定到23、387和417條肽段。樣品濃度為2.5mg/mL時(shí)，AAE、GDAAE和PDAAE的DPP-IV抑制率分別為3.47%、16.27%和42.35%；樣品濃度為2mg/mL時(shí)，AAE對(duì)PEP沒有抑制活性，GDAAE和PDAAE的PEP抑制率分別為23.14%和26.52%，。篩選發(fā)現(xiàn)新的活性肽LPQPPQE、GPAGPQGPR、LPPLTAD和PPGLPGSPGQ，其DPP-IV抑制率IC50分別為0.78、0.43、1.22