丹參乙酸鎂對(duì)鈣調(diào)素依賴蛋白激酶Ⅱ促大鼠血管重塑作用的影響.pdf

1、目的：研究探討丹參乙酸鎂對(duì)CaMKⅡδ促血管重塑作用的影響，抑制大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞內(nèi)CaMKⅡ的表達(dá)水平，觀察平滑肌細(xì)胞的增值、凋亡等生物學(xué)行為的變化，并探討細(xì)胞內(nèi)CaMKIIδ與血管特異性miRNAs（miRNA-21、miRNA-221、miRNA-223、miRNA-143、miRNA-145）的關(guān)系。
　　方法：以原代培養(yǎng)的雄性SD大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞為研究對(duì)象，根據(jù)丹參乙酸鎂溶液濃度的不同將細(xì)胞分為四個(gè)組：空白對(duì)照組、

2、高濃度組（100μ mol）、中濃度組（50μ mol）、低濃度組（25μ mol）。應(yīng)用CCK-8方法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性的變化，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡的變化，通過(guò)熒光定量 PCR檢測(cè)CaMKIIδ及相應(yīng)miRNAs表達(dá)情況的改變。
　　結(jié)果：⑴在丹參乙酸鎂干預(yù)大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞72h后，細(xì)胞內(nèi)CaMKIIδ的表達(dá)水平明顯降低。結(jié)果顯示，正常細(xì)胞與高、中、低不同濃度丹參乙酸鎂干預(yù)的細(xì)胞相比，其表達(dá)明顯下降（P＜0.05）。⑵使

3、用100μ mol丹參乙酸鎂干預(yù)平滑肌細(xì)胞72h后，細(xì)胞增殖活性受到明顯抑制，與正常生長(zhǎng)的細(xì)胞組相比，有顯著性差異(P＜0.05)，中濃度組與低濃度組有不同程度的抑制趨勢(shì)，但與空白對(duì)照組相比，無(wú)顯著差異（P＞0.05）；丹參乙酸鎂100μ mol干預(yù)平滑肌細(xì)胞96h后，細(xì)胞增殖活性抑制明顯(P＜0.05)，中濃度組及低濃度組有不同程度的抑制趨勢(shì)，但無(wú)顯著差異（P＞0.05）；100μ mol丹參乙酸鎂干預(yù)平滑肌細(xì)胞120h時(shí)，細(xì)胞細(xì)胞增

4、殖活性受到明顯抑制(P＜0.05)，50μ mol丹參乙酸鎂干預(yù)平滑肌細(xì)胞120h時(shí)（P＜0.05），低濃度組有抑制趨勢(shì)，但無(wú)顯著差異（P＞0.05）。⑶Transwell小室顯微鏡下細(xì)胞計(jì)數(shù)分別為112.0±2.1（正常細(xì)胞組），29.0±1.5（高濃度組），實(shí)驗(yàn)組相對(duì)于對(duì)照組遷移力明顯下降（P＜0.05）。⑷流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示各組細(xì)胞凋亡率分別為7.9％（正常細(xì)胞組），11.5%（低濃度組），13.5%（中濃度組），30.8%（高濃

5、度組），經(jīng)丹參乙酸鎂干預(yù)后的平滑肌細(xì)胞凋亡率明顯增加，并且抑制作用呈現(xiàn)濃度依賴性（7.9%vs11.5%；7.9%vs13.5%；7.9%vs30.8%）。⑸檢測(cè)miRNAs的表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)在抑制CaMKIIδ后的血管平滑肌細(xì)胞中miRNA-21表達(dá)下調(diào)（P＜0.05），miRNA-221、miRNA-223表達(dá)有下降趨勢(shì)，但與對(duì)照組相比，無(wú)顯著差異（P＞0.05），miRNA-143、miRNA-145的表達(dá)上調(diào)（P＜0.01）。實(shí)驗(yàn)

6、表明用丹參乙酸鎂抑制CaMKIIδ后，上述miRNAs表達(dá)發(fā)生了相應(yīng)變化，提示這些miRNAs調(diào)控細(xì)胞增殖、遷移、凋亡，進(jìn)而參與血管重塑的可能途徑與CaMKII密切相關(guān)。
　　結(jié)論：丹參乙酸鎂可以使細(xì)胞內(nèi)CaMKIIδ的表達(dá)水平降低，進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖及遷移，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，miRNA-21等血管特異性 miRNAs可能是通過(guò)對(duì)CaMKIIδ基因的調(diào)節(jié)，實(shí)現(xiàn)其促血管重塑的作用。研究證實(shí)在血管重塑形成中，CaMKIIδ是miRNA-21