Tip60(Ser86)磷酸化單克隆抗體的制備與應(yīng)用.pdf

1、Tip60（Tat Interactive Protein，60KDa）是目前研究最為透徹的MYST家族的組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶(Histone Acetyltrsferease，HAT)，主要存在于由至少18亞基組成的核蛋白穩(wěn)定復(fù)合物中。Tip60除了乙?；M蛋白H2A、H3、H4之外，還能修飾一系列非組蛋白，例如髓細(xì)胞組織增生癌基因c(c-Myc)和激酶ATM等。然而在某些情況下，Tip60也會(huì)抑制轉(zhuǎn)錄活性?，F(xiàn)已證明Tip60蛋白參與了

2、基因表達(dá)調(diào)控、染色質(zhì)重建、DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞凋亡和腫瘤發(fā)生等過(guò)程。已有的研究證實(shí)了Ser86和Ser90是Tip60的兩個(gè)磷酸化位點(diǎn)，其HAT活性也隨之增強(qiáng)，因HAT活性是Tip60參與DNA損傷應(yīng)答、β-淀粉樣前體切割等過(guò)程所必需的，研究表明磷酸化的Tip60在這些過(guò)程中發(fā)揮重要作用。由于缺乏可用于研究磷酸化Tip60的抗體，研究者無(wú)法開(kāi)展相關(guān)的實(shí)驗(yàn)。為了填補(bǔ)這個(gè)空白，我們成功地研發(fā)了抗Tip60pSer86的單克隆抗體。
　

3、　 本文介紹我們?nèi)绾尾捎秒s交瘤技術(shù)制備Tip60Ser86磷酸化的單克隆抗體，并對(duì)該抗體做相關(guān)鑒定和檢測(cè)。我們首先設(shè)計(jì)Ser86磷酸化多肽序列，將磷酸化多肽與血藍(lán)蛋白KLH（keyhole limpet hemocyamin）偶聯(lián)作為人工抗原免疫Bal b/C小鼠，通過(guò)ELISA法檢測(cè)抗血清效價(jià)，從效價(jià)最好的小鼠身上獲得脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行細(xì)胞融合，經(jīng)多次有限稀釋法篩選雜交瘤細(xì)胞，最終獲得6株穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤