hHcy對高血壓左心室重塑的基礎與臨床研究.pdf

1、研究目的：我國高血壓患者特點是合并同型半胱氨酸（Hcy）升高的比例很高，高同型半胱氨酸血癥（hHcy）不僅促進高血壓的發(fā)生進展，還是動脈粥樣硬化疾病的重要危險因子，對于Hcy在高血壓引起的心臟結(jié)構和功能變化中的作用目前研究較少。越來越多的證據(jù)顯示免疫炎癥反應在高血壓及其靶器官損傷（TOD）中發(fā)揮重要作用，輔助性T細胞17（Th17）和調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）是目前研究最多的與心血管疾病相關的免疫細胞，由Th17/Treg免疫失衡導致的炎

2、癥紊亂參與了高血壓及其靶器官的炎癥反應和損傷，Th17和Treg的分化分別受到其特異轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控，而轉(zhuǎn)錄因子的活化與其啟動子甲基化狀態(tài)密切相關，Hcy是蛋氨酸的代謝產(chǎn)物，通過由N5-甲基四氫葉酸提供甲基再生成蛋氨酸，蛋氨酸循環(huán)的重要意義在于為體內(nèi)廣泛存在的甲基化提供甲基，血液中Hcy的代謝受阻使得某些基因的甲基化降低，從而影響基因的表達，在高血壓疾病中hHcy對Th17和Treg的分化是否產(chǎn)生影響尚未見文獻報道。本研究旨在以高齡老年高

3、血壓患者為研究對象，分析Hcy對高齡老年原發(fā)性高血壓患者左心室肥厚的影響。進一步以自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）為研究對象，通過蛋氨酸喂養(yǎng)造成大鼠hHcy，觀察高Hcy對SHR心臟損傷的作用和對Th17/Treg平衡及其基因轉(zhuǎn)錄因子甲基化的影響。
　　研究內(nèi)容與方法：（1）378例年齡≥80歲的原發(fā)性高血壓老年病例選自2012年1月至2015年1月在我科住院的患者，按Hcy水平分為非H型高血壓組142例和H型高血壓組236例，記錄身高

4、、體質(zhì)量、用藥情況及收縮壓、舒張壓、血漿Hcy、血脂、腎功能等，彩色多普勒超聲診斷儀測定左心室形態(tài)結(jié)構，分析Hcy與左心室重構的關系。（2）7周齡雄性SHR經(jīng)適應性喂養(yǎng)一周，給予普通飼料喂養(yǎng)或添加蛋氨酸飼料喂養(yǎng)，后者在成功制成高Hcy模型后再分為蛋氨酸組和添加B族維生素的治療組，所有大鼠每四周測量體重，進行血壓測量及血漿Hcy濃度測定，分別于第8周、第12周、第16周和第20周行超聲心動圖檢查，取血行流式細胞學分析Th17/Treg細胞

5、比例、進行血漿炎癥指標測定以及心臟組織取材進行組織病理學和分子生物學檢測，20周末處死前進行有創(chuàng)血流動力學檢測。
　　結(jié)果：
　?。?）H型高血壓患者左心室肥厚比例高于非H型高血壓患者。H型高血壓組收縮壓、Hcy水平、左心室后壁厚度（LVPWT）、左心室射血分數(shù)（LVEF）、心室間隔厚度（IVST）及左心室質(zhì)量指數(shù)（LVMI）均高于非H型高血壓組[分別為（162.20±14.97）mmHg比（149.70±5.06）mmHg

6、，（19.76±5.83）μmol/L比（9.53±0.72）μmol/L，（9.77±2.35）mm比（9.21±2.68）mm，（9.74±3.15）mm比（8.51±2.42）mm，（118.64±39.38）g/m2比（101.85±41.71）g/m2]。單因素分析顯示Hcy與LVMI呈正相關，多變量logistic回歸顯示高hHcy是LVMI增高的獨立危險因素。
　?。?）蛋氨酸組與治療組前8周Hcy、收縮壓無差異，均

7、高于對照組，此后蛋氨酸組Hcy持續(xù)升高，收縮壓先升高于第12周達到最高后迅速降低；治療組于第8周后Hcy迅速下降，于第16周與對照組Hcy水平相同，血壓則為先小幅度升高后于第12周開始降低。蛋氨酸組大鼠較之對照組及治療組最早出現(xiàn)左心室舒張末期內(nèi)經(jīng)（LVEDD）增高，20周末舒張功能明顯低于對照組和治療組，收縮功能自第16周開始即出現(xiàn)明顯降低，至20周末亦分別低于對照組和治療組。第8周蛋氨酸組與治療組外周血Th17含量相近，均高于對照組，

8、第12周、第16周蛋氨酸組外周血Th17細胞含量繼續(xù)升高，均高于對照組與治療組，第20周末三組無差別。外周血中Treg的含量在實驗的各時間點均以治療組為最高，各時間點均高于對照組，第12周、16周、20周分別高于蛋氨酸組。第8周蛋氨酸組和治療組外周血中白介素-17（IL-17）、白介素-6（IL-6）濃度及心肌中IL-17 mRNA、孤束核受體γt（RORγt）mRNA均顯著高于對照組，第12周時蛋氨酸組仍保持在較高水平，高于對照組和治

9、療組，治療組已下降至同對照組相近，第16周維持第12周變化趨勢，且IL-6水平在治療組降至低于對照組水平，20周時三組間IL-17、IL-6、RORγt mRNA差異無統(tǒng)計學意義，IL-17 mRNA蛋氨酸組高于對照組和治療組。第8周蛋氨酸組和治療組外周血中轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）、白介素-10（IL-10）濃度及心肌中IL-10 mRNA、FoxP3 mRNA濃度均明顯高于對照組，差異達到統(tǒng)計學意義，之后治療組迅速增高并超過蛋氨

10、酸組，于第16周時蛋氨酸組和對照組上述四個指標水平保持相近，而治療組則分別高于對照組和蛋氨酸組，且此趨勢維持至第20周。Western blot檢測各組大鼠心肌中RORγt和叉頭蛋白3（FoxP3）蛋白表達的變化，結(jié)果顯示，第8周蛋氨酸組、治療組RORγt和FoxP3蛋白均顯著高于對照組；第12、16周治療組RORγt表達下降與對照組比較無統(tǒng)計學差異，兩組均低于蛋氨酸組；FoxP3蛋白在第12周、16周均為蛋氨酸組高于對照組而低于治療組

11、，差異達到統(tǒng)計學意義。進一步分析Th17和Treg細胞相關基因的甲基化水平，結(jié)果顯示IL-17與RORγt基因啟動子在蛋氨酸組呈低甲基化而在治療組呈高甲基化，與之相反，IL-10和FoxP3 DNA啟動子則在蛋氨酸組呈高甲基化而在治療組呈現(xiàn)低甲基化。病理組織染色顯示第8周蛋氨酸組和治療組血管周圍纖維面積與血管管腔面積比值(PVCA/LA)和膠原容積分數(shù)(CVF)均高于對照組，此后蛋氨酸組第12周至第20周實驗末均維持此趨勢，治療組則第8

12、周以后，PVCA/LA逐漸下降，第16周低于蛋氨酸組而略高于對照組，第20周降至與對照組水平相近，治療組CVF改善較PVCA/LA為快，于第12周開始低于蛋氨酸組略高于對照組，第16周及第20周與對照組無差異。
　　結(jié)論：hHcy是高血壓左心室肥厚的獨立危險因素，高Hcy可通過促進SHR大鼠心肌間質(zhì)纖維化和心肌間血管周圍膠原沉積導致心臟重構，引起心臟舒張及收縮功能下降，葉酸、維生素B12可降低Hcy，部分逆轉(zhuǎn)上述改變，保護心功能。