鹽霉素對DU145干細(xì)胞的抑制作用及其分子機(jī)制.pdf

1、目的：探討鹽霉素對前列腺癌細(xì)胞DU145體外細(xì)胞克隆形成的影響及及其分子機(jī)制，為開發(fā)應(yīng)用鹽霉素治療前列腺癌提供理論依據(jù)。
　　方法：①用不同濃度鹽霉素(0、0.25uM、0.5uM、1.0Um、2.0Um、4uM)及GSK抑制劑、紫杉醇、雷帕霉素、鹽霉素分別處理對數(shù)生長期DU145細(xì)胞，觀察其形成的體外克隆數(shù)目；②鹽霉素處理對數(shù)生長期DU145細(xì)胞，實驗分為DEAB組（陰性對照組）、DMSO組及鹽霉素5uM組，ALDH為標(biāo)記物，用

2、流式細(xì)胞儀檢測鹽霉素處理后DU145細(xì)胞干細(xì)胞百分比；③鹽霉素與紫杉醇、雷帕霉素、GSK抑制劑分別處理對數(shù)期DU145細(xì)胞，實驗分為DEAB組（陰性對照組）、DMSO組、紫杉醇5nM組、鹽霉素5nM+GSK3β抑制劑5uM組、鹽霉素5uM+紫杉醇5nM、鹽霉素5uM+雷帕霉素100nM組、鹽霉素5uM組，分別于對數(shù)期處理DU145細(xì)胞，以ALDH為標(biāo)記物，用流式細(xì)胞儀檢測各藥物處理后DU145細(xì)胞干細(xì)胞百分比；④不同濃度鹽霉素及同一濃度

3、鹽霉素不同處理時間分別處理對數(shù)生長期DU145細(xì)胞，用western-Blot法檢測鹽霉素處理后DU145細(xì)胞GSK-3β、β-catenin、c-Myc、CyclinD1、m-TOR、p70s6k、p-s6等蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：①鹽霉素對DU145克隆形成數(shù)目的影響：濃度為0、0.25uM、0.5uM、1.0uM、2.0uM、4.0uM處理組,各處理組形成的集落數(shù)分別是：119、86、67、53、31和3個；空白對照組、

4、鹽霉素、GSK抑制劑、鹽霉素+雷帕霉素、紫杉醇、雷帕霉素組形成克集落分別為123、1、115、0、119，67個。②鹽霉素對DU145干細(xì)胞的抑制作用：結(jié)果顯示DEAB（陰性對照組）組腫瘤干細(xì)胞比例為0.140％， DMSO處理組腫瘤干細(xì)胞比例為13.4%、鹽霉素5uM處理組干細(xì)胞比例為2.97%。③鹽霉素與其他臨床常用抗腫瘤藥物對DU145干細(xì)胞影響的比較：DEAB（陰性對照）組干細(xì)胞比例為0.160%、DMSO組干細(xì)胞比例為7.71

5、%、紫杉醇5nM組干細(xì)胞比例為6.59%、鹽霉素5uM+紫杉醇5nM組腫瘤干細(xì)胞比例為2.01%、鹽霉素5nM+GSK3β抑制劑5uM組腫瘤干細(xì)胞比例為2.08%、鹽霉素5uM+雷帕霉素100nM組腫瘤干細(xì)胞比例為1.70%、鹽霉素5uM組腫瘤干細(xì)胞比例為2.11%。④鹽霉素殺傷DU145干細(xì)胞作用機(jī)制： a、濃度處理組：在一定濃度范圍內(nèi)，鹽霉素處理濃度增加，GSK3β磷酸化增強(qiáng)，β-catenin、c-Myc、CyclinD1、m-T

6、OR、p70s6k、p-s6蛋白表達(dá)降低。b、時間處理組：在一定時間范圍內(nèi)，鹽霉素處理時間增加，GSK3β磷酸化增強(qiáng)，β-catenin、c-Myc、CyclinD1、m-TOR、p70s6k、p-s6蛋白表達(dá)降低。
　　結(jié)論：⑴鹽霉素能夠有效抑制前列腺癌DU145細(xì)胞體外克隆形成，并對其干細(xì)胞具有殺傷作用。⑵鹽霉素可能通過抑制β-catenin及mTOR通路信號傳導(dǎo)實現(xiàn)抑制腫瘤干細(xì)胞，GSK3β可能是鹽霉素殺傷腫瘤干細(xì)胞的作用靶