基于定量蛋白質(zhì)組學研究OLFM4在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制.pdf

1、目的：胃癌是危害人類健康的常見惡性腫瘤之一，名列全球第五大常見腫瘤。據(jù)最新統(tǒng)計，全球每年新發(fā)病例約95萬人，死亡約72萬人。胃癌病人的預后與腫瘤分期密切相關(guān)，而腫瘤的分期與腫瘤浸潤深度、局部淋巴結(jié)和遠端臟器是否轉(zhuǎn)移相關(guān)。目前胃癌的發(fā)病及轉(zhuǎn)移的機制尚不明確。因此深入研究胃癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)移機制顯得尤為重要。近年來，蛋白質(zhì)組學技術(shù)的快速發(fā)展為我們研究疾病的發(fā)病機制提供了強有力的工具。本研究旨在運用同位素標記的相對和絕對定量技術(shù)（iTRAQ）尋找

2、與胃癌發(fā)病相關(guān)的蛋白，探討其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制。
　　方法：本研究運用iTRAQ技術(shù)對胃癌組織和癌旁組織進行定量蛋白質(zhì)組學研究，收集15例胃癌病人的胃癌組織和癌旁組織，通過iTRAQ篩選出胃癌組織和癌旁組織中差異表達的蛋白分子。從篩選出的蛋白分子中進一步選出幾個蛋白，運用免疫印跡、實時定量PCR驗證在蛋白水平、RNA水平差異蛋白的表達情況，并且用組織芯片進行免疫組化染色在組織水平驗證差異蛋白的表達。然后運用胃癌細胞株模型，

3、利用小干擾RNA技術(shù)特異性的下調(diào)蛋白的表達后觀察其對胃癌細胞株生物學行為的影響。
　　結(jié)果：通過iTRAQ技術(shù)以及質(zhì)譜分析，共篩選出了134個差異表達的蛋白，其中51個蛋白上調(diào)，83個蛋白下調(diào)。通過免疫印跡和實時定量PCR驗證了AZU1、CPVL、OLFM4、VIL1等差異蛋白的表達，發(fā)現(xiàn) AZU1、CPVL、OLFM4、VIL1在胃癌組織的表達明顯高于癌旁組織，免疫組化檢測也有同樣的結(jié)果。結(jié)果與iTRAQ結(jié)果一致。從差異蛋白中篩

4、選出 OLFM4進行下一步的研究，在兩株胃癌細胞AGS、MKN28中通過小干擾RNA技術(shù)下調(diào)胃癌細胞株中OLFM4的表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn)胃癌細胞株中OLFM4的表達下調(diào)后，胃癌細胞的增殖生長能力，遷移和侵襲能力均明顯降低。
　　結(jié)論：本研究成功的運用了定量蛋白質(zhì)組學方法篩選胃癌組織與癌旁組織中差異表達的蛋白，通過進一步的驗證表明iTRAQ技術(shù)的結(jié)果是可靠的。同時也發(fā)現(xiàn)過表達的OLFM4在胃癌的發(fā)病和轉(zhuǎn)移過程可能起了一定的促進作用，而降低