神經(jīng)導(dǎo)向蛋白Semaphorin 3E在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用和機(jī)制的研究.pdf

1、目的:神經(jīng)導(dǎo)向蛋白Semaphorin3E(Sema3E)在多種腫瘤中表達(dá)上調(diào)并能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，但對(duì)其在胃癌發(fā)生過(guò)程中的研究尚屬空白，且Sema3E在腫瘤中異常表達(dá)的機(jī)制目前還未被闡明。本研究主要探討Sema3E在胃癌生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和侵襲中的作用及其機(jī)制，并分析表觀遺傳學(xué)改變對(duì)Sema3E轉(zhuǎn)錄調(diào)控的影響。
　　方法:1、采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和免疫組織化學(xué)等技術(shù)方法分析胃癌組織中Sema3E mRNA和蛋白表達(dá)水平

2、與正常組織相比的變化情況。2、使用DAC，TSA，MGCD0103，MC1568，C646等特異性化學(xué)抑制劑，過(guò)表達(dá)和基因敲減組蛋白乙酰化酶p300，熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)等方法研究表觀遺傳學(xué)變化在SEMA3E轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的作用機(jī)制。3、構(gòu)建SEMA3E真核表達(dá)載體，研究過(guò)表達(dá)Sema3E對(duì)胃癌細(xì)胞增殖能力，克隆形成能力，裸鼠皮下成瘤能力，遷移能力以及體外重組基底膜侵襲能力的影響，并對(duì)其分子機(jī)制進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:1、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和免

3、疫組織化學(xué)等實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Sema3E的mRNA水平和蛋白水平在胃癌樣本中表達(dá)明顯下調(diào)。2、Ⅰ類組蛋白去乙?；?HDAC)和組蛋白乙?；竝300參與SEMA3E在胃癌細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。3、過(guò)表達(dá)Sema3E能夠有效抑制BGC-823、MGC-803、MKN-45等胃癌細(xì)胞株在體外的細(xì)胞增殖能力和克隆形成能力;抑制MGC-803體外遷移能力和重組基底膜侵襲能力;并在體內(nèi)抑制裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)。Sema3E通過(guò)細(xì)胞周期G0/G1期阻滯，

4、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡和降低細(xì)胞信號(hào)通路中ERK、AKT等酶的磷酸化水平，發(fā)揮了對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的抑制作用;通過(guò)抑制twist表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)E-Cadherin表達(dá)上調(diào)，抑制ERK和AKT磷酸化進(jìn)而抑制胃癌細(xì)胞的遷移和重組基底膜侵襲。
　　結(jié)論:本研究表明，胃癌中Sema3E表達(dá)下調(diào)與表觀遺傳學(xué)調(diào)控的失衡密切相關(guān)，胃癌中組蛋白去乙酰化酶和組蛋白乙?；副磉_(dá)異常導(dǎo)致Sema3E的表達(dá)下調(diào);Sema3E對(duì)胃癌發(fā)生發(fā)展具有重要作用。綜上所述，在胃