阿爾茲海默病細胞模型中DNA去甲基化對Nrf2表達及活性的影響.pdf

1、核因子E2相關因子2（Nuclear factor erythroid2-related factor2， Nrf2）是重要的抗氧化應激核轉錄因子。越來越多的研究證據(jù)表明氧化應激在阿爾茲海默?。ˋlzheimer’s disease, AD）的發(fā)病過程中起著關鍵作用。一些關于AD的動物和臨床研究發(fā)現(xiàn)，AD腦內Nrf2的表達降低，但其潛在機制尚不明確。本研究以穩(wěn)定轉染Swedish家族突變的人APP695的小鼠神經(jīng)母細胞瘤N2a/APPs

2、we細胞作為AD的細胞模型，予以DNA甲基化轉移酶（DNA methyltransferase，Dnmts）抑制劑5-氮雜-2-脫氧胞苷（5-aza-2′-deoxycytidine，5-Aza）處理，采用亞硫酸氫鹽測序聚合酶鏈反應法（Bisulfite-sequencing PCR，BSP）檢測5-Aza處理前后細胞中Nrf2基因啟動子區(qū)DNA的甲基化水平；Q-PCR檢測細胞中Nrf2，NQO1的mRNA表達水平，Western bl

3、ot檢測細胞中Dnmts，總Nrf2，核內Nrf2，NQO1的蛋白質表達水平；免疫熒光法檢測5-Aza處理前后Nrf2在細胞內的分布情況。結果顯示：①.5-Aza處理后能有效上調N2a/APPswe細胞中Nrf2的mRNA和蛋白水平；②.5μM的5-Aza處理后N2a/APPswe細胞中Nrf2啟動子區(qū)DNA發(fā)生去甲基化；③.5-Aza能夠抑制N2a/APPswe細胞中Dnmts的表達；④.5-Aza能促進Nrf2的核轉位，上調Nrf2