減壓對(duì)脊髓壓迫性損傷后脫髓鞘病變和腦源性神經(jīng)生長因子BDNF表達(dá)變化的影響.pdf

1、第一部分脊髓壓迫減壓后脫髓鞘病變與BDNF表達(dá)的相關(guān)性研究
　　目的：觀察在壓迫性脊髓損傷(compressed spinal cord injury，CSCI)后腦源性神經(jīng)生長因子（Brain-derived neurotrophic factor，BDNF）的表達(dá)變化，探討其對(duì)有髓神經(jīng)纖維脫髓鞘病變的影響，為闡明BDNF在髓鞘保護(hù)中的作用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：成年Sp rag ue-Daw ley雄性大鼠80只，隨機(jī)

2、將其分成4組：正常組、假手術(shù)組和減壓組，后者再分為2個(gè)亞組，減壓組1和減壓組2，每組各20只。采用自行設(shè)計(jì)的大鼠壓迫器制作大鼠CS CI模型，模型制作成功后，減壓組1和減壓組2分別于脊髓壓迫1 h和12 h后行脊髓壓迫減壓手術(shù)；假手術(shù)組僅作脊髓顯露,不作脊髓壓迫；正常組不做任何處理。分別于脊髓壓迫減壓后1、3、7d，采用B BB（Bs so B eat tie Br esn aha n）評(píng)分觀察神經(jīng)功能改變情況；采用鋨酸染色（osmic

3、 acid staining）觀察有髓神經(jīng)纖維髓鞘變化情況；免疫印跡(Western blot)和免疫熒光雙標(biāo)(double-labelling immunofluorescence)檢測(cè)BD NF和髓鞘堿性蛋白( my eli n b asi c p rot ein，M BP)的表達(dá)量的變化。
　　結(jié)果：正常組和假手術(shù)組B BB評(píng)分為21分，基本正常，其神經(jīng)纖維髓鞘結(jié)構(gòu)完整，數(shù)量并未減少，與假手術(shù)組相比較，兩個(gè)減壓組都出現(xiàn)BBB

4、評(píng)分降低和神經(jīng)纖維脫髓鞘病變，并隨著時(shí)間的延長，B BB評(píng)分逐漸降低，髓鞘逐漸水腫、變性、脫失，而與減壓組2相比較，減壓組1的B BB評(píng)分降低緩慢，髓鞘脫失程度較輕，殘存量增多，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P＜0.05)；We ste rn blo t和免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示：與正常組相比較，兩個(gè)減壓組的MB P和BDNF表達(dá)量在也隨著時(shí)間的延長而逐漸降低，而與減壓組2相比較，減壓組1的M BP和B DNF降低幅度明顯降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.

5、05)。
　　結(jié)論：CSCI后脊髓神經(jīng)纖維發(fā)生了脫髓鞘病變，病變程度與BDN F的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)；而早期減壓可減輕神經(jīng)纖維的脫髓鞘病變的程度，增加BD NF表達(dá)和神經(jīng)纖維的殘存量。提示BN DF對(duì)C SC I脫髓鞘具有保護(hù)作用。
　　第二部分脊髓壓迫性損傷后BDNF的表達(dá)變化機(jī)制的初步探討
　　目的：CSCI后，對(duì)其的壓迫前段、壓迫段和壓迫后段的 BDNF的表達(dá)變化進(jìn)行分節(jié)段觀察，以便對(duì)CSCI后BDNF的表達(dá)變化機(jī)制進(jìn)

6、行初步探討。
　　方法：成年健康Spr agu e-D awl ey雄性大鼠60只，隨機(jī)將其分成3組：模型組、假手術(shù)組和正常組，每組各20只。模型制作方法如第一部分，正常組不做任何處理，假手術(shù)組僅作脊髓顯露,不作脊髓壓迫,模型組作脊髓壓迫24h。于C SCI24 h后分別取出脊髓的壓迫前段、壓迫段和壓迫后段,利用鋨酸（os mic ac id s tain ing）和L FB( lux ol f ast bl ue)染色觀察有髓神

7、經(jīng)纖維變化情況；免疫印跡(We ste rn blot)檢測(cè)BDNF和髓鞘堿性蛋白( myelin basic protein，MBP)的表達(dá)量的變化。
　　結(jié)果：鋨酸和LFB結(jié)果表明：正常組和假手術(shù)組各段有髓神經(jīng)纖維數(shù)量無顯著差異，CSC I后24h時(shí)，模型組壓迫前段(T11)有髓神經(jīng)纖維數(shù)量與假手術(shù)組T11比較，無明顯變化（P＞0.05）,而模型組壓迫段（T12）和壓迫后段（L1）與假手術(shù)組相應(yīng)節(jié)段比較有髓神經(jīng)纖維殘存數(shù)量降低

8、，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P＜0.05),且模型組壓迫段（T12）比壓迫后段( L1)有髓神經(jīng)纖維殘存數(shù)量降低更為嚴(yán)重(P＜0.05)；W est ern b lo t結(jié)果顯示：與假手術(shù)組相應(yīng)節(jié)段比較，模型組壓迫前段(T11) B DNF的表達(dá)量升高( P＜0.05)，MBP表達(dá)量未見明顯變化，而模型組中壓迫段（T12）和壓迫后段（L1）的BDNF和MBP表達(dá)量明顯下降(P＜0.05),且模型組壓迫段（T12）降低更為顯著(P＜0.05)。<