大鼠皮層AA-COX2通路參與抑郁癥發(fā)病機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察慢性應(yīng)激大鼠的抑郁行為與皮層神經(jīng)元COX2表達(dá)變化的相關(guān)性，并從皮層CO X2-EP s-BDNF通路初步探討抑郁癥發(fā)病機(jī)制。
　　方法：1.大鼠抑郁模型的建立與皮層中AA-COX2通路改變：雄性SD大鼠20只，隨機(jī)分為正常組（n=10）和模型組（n=10），正常組大籠飼養(yǎng)，每籠5只，自由攝水進(jìn)食且不給予任何刺激；模型組孤養(yǎng)并給予慢性不可預(yù)見性溫和刺激（chronic unpredictable mild stress，

2、 C UMS），連續(xù)42d，造模完成后進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試。
　　2. COX2干預(yù)對(duì)慢性應(yīng)激大鼠抑郁行為的影響：
　?。?）雄性SD大鼠50只，隨機(jī)分為5組（n=10），即正常對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組、美洛昔康1 mg?kg-1組和美洛昔康3 mg?kg-1組，正常組大鼠處理同第一部分，其余四組大鼠孤養(yǎng)并給予42d CUMS，給藥組大鼠分別灌胃給予舍曲林(5 mg?kg-1）、美洛昔康（1、3 mg?kg-1），模型組與正

3、常組給予等體積0.5％ CMC-Na，每天一次，連續(xù)21d，給藥完成后進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試。
　?。?）另取雄性SD大鼠40只，并將其隨機(jī)分為3組，即空載病毒（control）組（n=10）大籠飼養(yǎng)，自由攝水進(jìn)食且不給予任何刺激；COX2過表達(dá)慢病毒注射+CUMS組（n=10）和空載病毒+CUMS組（n=20）。大鼠施行側(cè)腦室定位注射導(dǎo)管埋管，從術(shù)后第5天開始給予 CUMS，并分別在術(shù)后第5d，12d，19d進(jìn)行腦室內(nèi)慢病毒注射，每只1

4、5μl/次。給予C UMS42d后進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試，空載病毒+C UMS組大鼠隨機(jī)分為兩組，即COX2 RNAi（n=10）和CUMS組（n=10），分別腦室內(nèi)注射COX2 RNAi慢病毒和空載病毒，每7天一次，共3次，每只15μl/次，第3次注射后第7d進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試。
　　在以上分組和干預(yù)的基礎(chǔ)上采用糖水實(shí)驗(yàn)、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠行為學(xué)變化，以蘇木精-伊紅染色觀察大鼠皮層神經(jīng)元形態(tài)變化；ELISA和生化酶學(xué)法測(cè)定大鼠皮

5、層組織PGE2、TNF-α、IL-1β、cAMP、MDA含量和SOD活性；免疫組化檢測(cè)皮層BDNF蛋白表達(dá)情況；RT-PCR檢測(cè)大鼠皮層COX2 mRNA表達(dá)；Western blot檢測(cè)COX2、EP2、EP3、PKAⅡαreg、CREB、p-CREB、BDNF蛋白含量。
　　結(jié)果：1.與正常組相比，CUMS大鼠糖水偏好率下降（P<0.01），曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)水平（P<0.01）和垂直得分（P<0.01）減少，強(qiáng)迫游泳靜止不動(dòng)時(shí)間增加（

6、P<0.01）；皮層神經(jīng)元出現(xiàn)明顯核固縮；皮層 PGE2、TNF-α、IL-1β、MDA含量增加（P<0.01），而SOD活性下降（P<0.01）；皮層 COX2 mRNA和蛋白的表達(dá)（P<0.01）均增加。
　　2.與單獨(dú)給予 C UMS的空載病毒大鼠相比，在給予大鼠 C UMS的同時(shí)側(cè)腦室注射過表達(dá) COX2慢病毒，能進(jìn)一步降低大鼠糖水偏好率，明顯減少大鼠曠場(chǎng)水平和垂直得分（P<0.05），增加強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間（P<0.05）

7、；增加皮層PGE2、TNF-α、IL-1β、MDA含量（P<0.01或P<0.05）和降低SOD活性（P<0.05），減少cAMP含量（P<0.05），顯著增加COX2 mRNA（P<0.05）表達(dá)的同時(shí)，COX2、EP2和EP3蛋白表達(dá)有上升趨勢(shì)，PKAⅡα reg蛋白表達(dá)顯著減少（P<0.05），而p-CREB、BDNF蛋白表達(dá)有下降趨勢(shì)。當(dāng)給予美洛昔康抑制 COX2活性或側(cè)腦室注射COX2 RNAi慢病毒，則能明顯提高抑郁大鼠糖水

8、偏好率（P<0.05），增加大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)水平和垂直得分（P<0.01），減少?gòu)?qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間（P<0.05）；顯著減少皮層PGE2、TNF-α、IL-1β、MDA含量（P<0.01）和增加SOD活性（P<0.01）；明顯增加皮層cAMP含量（P<0.01）和PKAⅡα reg、p-CREB、BDNF蛋白表達(dá)（P<0.01或P<0.05），下調(diào)COX2 mRNA（P<0.01）和蛋白（P<0.05）以及EP2（P<0.01）、EP3（P<