Toll樣受體4表達(dá)變化對(duì)創(chuàng)傷性腦損傷后小鼠海馬區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：
　　探討利用小鼠創(chuàng)傷性腦損傷（traumatic brain injury, TBI）打擊模型模擬創(chuàng)傷環(huán)境并抑制Toll樣受體4（toll-like receptor4, TLR4）表達(dá)后小鼠行為學(xué)表現(xiàn)變化、海馬齒狀回部髓樣分化因子88（myeloid differentiation primary response gene88, MYD88）蛋白質(zhì)及信使RNA（messenger RNA, mRNA）水平表達(dá)變化，以及

2、抑制TLR4與神經(jīng)干細(xì)胞（neural stem cells, NSCs）變化的關(guān)系。
　　方法：
　　使用PCI-3000（precision cortical impactor-3000）打擊裝置建立小鼠TBI模型，使用TLR4抑制劑CLI-095腹腔注射抑制創(chuàng)傷后TLR4表達(dá)，使用5-溴脫氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxyuridine, BrdU）標(biāo)記表達(dá)變化的海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞，使用巢蛋白（nestin）標(biāo)記

3、表達(dá)變化的NSCs，采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real-time polymerase chain reaction，RT-PCR）及行為學(xué)檢測(cè)方法礦場(chǎng)實(shí)驗(yàn)，高架十字實(shí)驗(yàn)，Morris水迷宮（Morris water maze, MWM）實(shí)驗(yàn)，以及免疫熒光染色法和蛋白質(zhì)印跡技術(shù)分別檢測(cè)創(chuàng)傷72小時(shí)后小鼠行為學(xué)變化、海馬區(qū)MYD88表達(dá)變化情況以及NSCs變化特征。
　　結(jié)果：
　　1．創(chuàng)傷模型建立并腹腔注射TLR4抑制劑對(duì)

4、TLR4進(jìn)行抑制后，72小時(shí)海馬區(qū)MYD88 mRNA表達(dá)量較僅腹腔注射溶劑減少（P<0.05），但 CLI-095組及對(duì)照組MYD88 mRNA表達(dá)水平均較假手術(shù)組高（P<0.05）。礦場(chǎng)實(shí)驗(yàn)，高架十字實(shí)驗(yàn)，Morris水迷宮檢測(cè)TBI72小時(shí)后小鼠發(fā)現(xiàn)其學(xué)習(xí)、記憶及情緒功能水平下降，抑制TLR4后有所好轉(zhuǎn)（P<0.05），但仍低于假損傷組（P<0.05）。
　　2．腹腔注射CLI-095后MYD88蛋白表達(dá)下降，低于溶劑組，但

5、較假手術(shù)組表達(dá)程度高（P<0.05），海馬齒狀回部 BrdU陽(yáng)性細(xì)胞（即中樞神經(jīng)系統(tǒng)增殖細(xì)胞）表達(dá)程度增高，低于假手術(shù)組，但仍高于溶劑組（P<0.05）。
　　3．MYD88蛋白表達(dá)在TBI后72小時(shí)增高，但TBI后6小時(shí)腹腔注射CLI-095并連續(xù)注射3天后MYD88表達(dá)下降，而CLI-095腹腔注射后BrdU以及nestin標(biāo)記細(xì)胞數(shù)均較腹腔注射溶劑增多（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1．TBI影響小鼠行為學(xué)水

6、平，且MYD88的mRNA水平在抑制TLR4后下調(diào)，該結(jié)果可在考慮如何恢復(fù)創(chuàng)傷后小鼠神經(jīng)功能上發(fā)揮一定作用，TLR4可能是神經(jīng)損傷及修復(fù)的關(guān)鍵因素之一。
　　2．海馬區(qū)MYD88的表達(dá)與NSCs變化相反，并證實(shí)抑制TLR4可能激活并引起NSCs的增殖，從而促進(jìn)受損神經(jīng)細(xì)胞的修復(fù)。
　　3．這個(gè)結(jié)果說(shuō)明海馬區(qū)包括 NSCs在內(nèi)的潛在增殖細(xì)胞表達(dá) TLR4，并且 TBI后抑制TLR4與NSCs增殖之間存在潛在聯(lián)系。因此可以說(shuō)海馬