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1、目的:了解甲氨蝶呤對(duì)C反應(yīng)蛋白在體外培養(yǎng)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞中的致炎作用的影響。
方法:體外培養(yǎng)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞和正常人成纖維細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞。分別設(shè)立空白對(duì)照組、CRP刺激組、MTX加CRP作用組,用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶連反應(yīng)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)各組IL-6、MMP3、TNFα的mRNA和蛋白表達(dá)。免疫印跡法檢測(cè)各組磷酸化P65、IκB的表達(dá)。
結(jié)果:CRP能明顯上調(diào)RAFLS表達(dá)的IL-
2、6、MMP3、TNFα的mRNA和蛋白表達(dá)水平,且比HFLS明顯升高,提示CRP有促炎作用。CRP能使RAFLS的磷酸化P65水平明顯增加,IκB明顯減少,提示 CRP能活化 NF-κB信號(hào)通路。MTX能下調(diào) RAFLS的CRP的mRNA和蛋白表達(dá)。MTX能拮抗CRP上調(diào)RAFLS表達(dá)IL-6、MMP3、TNFα的mRNA和蛋白表達(dá)水平的作用,能拮抗CRP增加RAFLS的磷酸化P65水平和降解IκB的作用。
結(jié)論:MTX可以通
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