膽囊癌危險因素再探討及幽門螺桿菌和雌激素促進膽道上皮異常增殖的研究.pdf

1、上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文第I頁申請上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文膽囊癌危險因素再探討及幽門螺桿菌和雌激素促進膽道膽囊癌危險因素再探討及幽門螺桿菌和雌激素促進膽道上皮異常增殖的研究上皮異常增殖的研究學(xué)校：上海交通大學(xué)院系：醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院班級：2013級博士班姓名：周迪學(xué)號：0137229233專業(yè)：外科學(xué)（普外科）研究方向：膽道惡性腫瘤的診療導(dǎo)師：全志偉教授資助基金：國家自然基金青年基金項目ERβNrf2在幽門螺桿菌誘發(fā)膽道上皮惡性轉(zhuǎn)化中的

2、作用機制研究上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院2016年4月上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文第III頁摘要目的目的第一部分探討膽囊癌的危險因素并建立用于早期診斷的列線圖。對于雌激素和H.pyli兩個潛在危險因素，第二部分研究將兩者作用于膽道上皮細胞HIBEC后對其增殖、凋亡、遷移能力以及氧化性DNA損傷的影響。第三部分探討兩者對氧化應(yīng)激相關(guān)通路Nrf2ARE以及凋亡通路的影響。方法方法第一部分回顧性研究III期膽囊癌患者的臨床資料進行單因素和Log

3、istic回歸分析，在此基礎(chǔ)上建立列線圖。其預(yù)測準(zhǔn)確性分別經(jīng)內(nèi)驗證以及外驗證，并做出校正曲線。第二部分中，將17β雌二醇（109molL）以及H.pyli（MOI=1:1）作用于HIBEC細胞并反復(fù)傳代至15代后，進行：（1）CCK8、免疫細胞化學(xué)檢測Ki67的表達水平以及平板克隆實驗探究細胞增殖能力；（2）AnnexinVPI檢測凋亡水平；（3）Transwell檢測遷移能力；（4）流式細胞術(shù)檢測ROS的表達水平，熒光染色觀察8OHd

4、G的表達，評價氧化性DNA損傷情況。第三部分中，（1）PCR以及Westernblot檢測Nrf2、Keap1、NQO1、HO1的轉(zhuǎn)錄和翻譯水平；（2）免疫熒光雙染以及Westernblot檢測細胞核與胞漿中Nrf2蛋白的表達水平，探究Nrf2是否轉(zhuǎn)位入核；（3）CoIP檢測Nrf2與Keap1的相互作用；（4）EMSA檢測Nrf2是否與NQO1的DNA結(jié)合；（5）Westernblot檢測凋亡通路中關(guān)鍵蛋白酶的表達水平。結(jié)果結(jié)果第一部

5、分中，納入構(gòu)建列線圖的相關(guān)因素包括年齡、危險飲酒、確診的膽石癥病程、影像學(xué)診斷提示膽囊萎縮、膽囊壁鈣化、息肉樣增生、膽囊壁厚窄比和粘膜線中斷。內(nèi)、外驗證均得到較高的一致性指數(shù)Cindex（0.889和0.856）。第二及第三部分中發(fā)現(xiàn)：H.pyli以及17β雌二醇可單獨或協(xié)同促進HIBEC細胞：OD450值、Ki67表達水平以及克隆形成率均顯著升高（p0.05），凋亡率降低（p=0.011以及0.005），穿膜細胞數(shù)顯著增加（p=0.0