多穗柯活性組分提取分離及功能特性的研究.pdf

1、本論文以多穗柯為材料，采用小鼠巨噬細(xì)胞 RAW264.7和小鼠肝癌細(xì)胞Hepa1c1c7兩種細(xì)胞模型，以抗炎、抗癌活性為導(dǎo)向，以一氧化氮(NO)抑制率≥50％和醌還原酶(QR)誘導(dǎo)活性≥2為篩選指標(biāo)，對(duì)提取的多穗柯?lián)]發(fā)性組分、非揮發(fā)性組分進(jìn)行功能評(píng)價(jià)，并對(duì)非揮發(fā)性組分中具抗炎、抗癌功能的分離單體通過質(zhì)譜、核磁共振等技術(shù)進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定。此外，利用 ELISA、western-blot等技術(shù)對(duì)多穗柯分離單體的抗炎、抗癌機(jī)制進(jìn)行了探討，獲得結(jié)

2、果主要如下：
　　1、多穗柯?lián)]發(fā)性組分提取、鑒定及其抗癌活性測(cè)定
　　以多穗柯為材料，采用同時(shí)蒸餾萃取法（SDE）提取其香氣組分，通過氣質(zhì)聯(lián)用儀（GC-MS）對(duì)香氣組分進(jìn)行成分分析，并利用小鼠肝癌細(xì)胞Hepa1c1c7為細(xì)胞模型對(duì)香氣組分和主要的單體物質(zhì)進(jìn)行抗癌活性測(cè)定。結(jié)果顯示提取的多穗柯香氣GC-MS鑒定出80種組分，占香精油總量的92.56%，其中香葉基丙酮、β-紫羅酮、桉油烯醇、壬醛等組分為多穗柯香氣的主要成分。抗癌

3、活性鑒定表明，多穗柯?lián)]發(fā)性組分的濃度為27.50±0.10μg/mL時(shí)可誘導(dǎo)QR活性達(dá)到倍增，具有較強(qiáng)抗癌活性；其中香葉基丙酮和壬醛兩個(gè)主要的揮發(fā)性單體成分誘導(dǎo) QR活性達(dá)到倍增的濃度分別為283.10±0.10μg/mL、297.77±0.12μg/mL。
　　2、多穗柯非揮發(fā)性組分提取分離及其抗炎、抗癌活性研究
　?。?）對(duì)多穗柯進(jìn)行30%乙醇/乙酸乙酯提取獲得粗提物，利用 RAW264.7和Hepa1c1c7細(xì)胞模型分

4、別測(cè)定粗提取物的抗炎、抗癌活性，結(jié)果表明粗提物具有較好的抗炎抗癌活性。將粗提物用硅膠柱層析分離得到F1～F4四個(gè)組分?；钚苑治霰砻鱂3同時(shí)具有較強(qiáng)抗炎、抗癌活性，其誘導(dǎo) QR活性達(dá)到倍增的濃度為12.19±0.08μg/mL，NO抑制率達(dá)到50%的濃度為18.36±1.20μg/mL。
　?。?）F3經(jīng)TLC分離出F3-1～F3-8八個(gè)組分，均具較好的抗炎、抗癌活性，其誘導(dǎo)QR活性達(dá)到倍增的濃度范圍在1.59±0.09～28.3±

5、0.02μg/mL，抑制NO達(dá)到50%的濃度范圍在11.9±1.39～51.85±5.25μg/mL。液相色譜分析表明F3-5和F3-8兩個(gè)組分物質(zhì)組成較為單一。
　?。?）對(duì)F3-5和F3-8經(jīng)半制備色譜分離獲得兩個(gè)單體組分F3-5-1和F3-8-1。活性測(cè)定表明，F(xiàn)3-5-1抑制NO達(dá)到50%和誘導(dǎo)QR活性達(dá)到倍增的濃度分別為50.25±1.18μg/mL、22.50±0.39μg/mL,而F3-8-1抑制NO達(dá)到50%和誘導(dǎo)

6、QR活性達(dá)到倍增的濃度分別為30.11±3.13μg/mL、47.08±0.21μg/mL。
　　3、多穗柯抗炎、抗癌活性雙功能單體組分的結(jié)構(gòu)鑒定
　　對(duì)從多穗柯中分離到的組分F3-5-1和F3-8-1分別進(jìn)行高分辨率質(zhì)譜及核磁共振分析，結(jié)果表明F3-5-1具有色原酮的基本母核結(jié)構(gòu)，推測(cè)為秦皮乙素；F3-8-1為催吐蘿芙木葉醇，是一種倍半萜類物質(zhì)。
　　4、多穗柯活性組分抗炎及抗癌作用機(jī)理的研究
　　抗炎方面，利

7、用LPS誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7體外炎癥模型，研究不同濃度的催吐蘿芙木葉醇對(duì)RAW264.7細(xì)胞中炎癥因子TNF-α和iNOS表達(dá)的影響。結(jié)果顯示：采用不同濃度催吐蘿芙木葉醇處理細(xì)胞24 h后，細(xì)胞中TNF-α和iNOS蛋白表達(dá)量隨樣品濃度升高而減少，并呈劑量依賴關(guān)系，說明催吐蘿芙木葉醇在RAW264.7細(xì)胞中能通過抑制細(xì)胞炎癥因子TNF-α和iNOS的蛋白表達(dá)發(fā)揮抗炎功能。
　　抗癌方面，利用小鼠肝癌細(xì)胞Hepa1c1c