多穗柯活性組分提取分離及功能特性的研究.pdf

1、本論文以多穗柯為材料，采用小鼠巨噬細胞 RAW264.7和小鼠肝癌細胞Hepa1c1c7兩種細胞模型，以抗炎、抗癌活性為導(dǎo)向，以一氧化氮(NO)抑制率≥50％和醌還原酶(QR)誘導(dǎo)活性≥2為篩選指標，對提取的多穗柯?lián)]發(fā)性組分、非揮發(fā)性組分進行功能評價，并對非揮發(fā)性組分中具抗炎、抗癌功能的分離單體通過質(zhì)譜、核磁共振等技術(shù)進行了結(jié)構(gòu)鑒定。此外，利用 ELISA、western-blot等技術(shù)對多穗柯分離單體的抗炎、抗癌機制進行了探討，獲得結(jié)

2、果主要如下：
　　1、多穗柯?lián)]發(fā)性組分提取、鑒定及其抗癌活性測定
　　以多穗柯為材料，采用同時蒸餾萃取法（SDE）提取其香氣組分，通過氣質(zhì)聯(lián)用儀（GC-MS）對香氣組分進行成分分析，并利用小鼠肝癌細胞Hepa1c1c7為細胞模型對香氣組分和主要的單體物質(zhì)進行抗癌活性測定。結(jié)果顯示提取的多穗柯香氣GC-MS鑒定出80種組分，占香精油總量的92.56%，其中香葉基丙酮、β-紫羅酮、桉油烯醇、壬醛等組分為多穗柯香氣的主要成分?？拱?/p>

3、活性鑒定表明，多穗柯?lián)]發(fā)性組分的濃度為27.50±0.10μg/mL時可誘導(dǎo)QR活性達到倍增，具有較強抗癌活性；其中香葉基丙酮和壬醛兩個主要的揮發(fā)性單體成分誘導(dǎo) QR活性達到倍增的濃度分別為283.10±0.10μg/mL、297.77±0.12μg/mL。
　　2、多穗柯非揮發(fā)性組分提取分離及其抗炎、抗癌活性研究
　?。?）對多穗柯進行30%乙醇/乙酸乙酯提取獲得粗提物，利用 RAW264.7和Hepa1c1c7細胞模型分

4、別測定粗提取物的抗炎、抗癌活性，結(jié)果表明粗提物具有較好的抗炎抗癌活性。將粗提物用硅膠柱層析分離得到F1～F4四個組分。活性分析表明F3同時具有較強抗炎、抗癌活性，其誘導(dǎo) QR活性達到倍增的濃度為12.19±0.08μg/mL，NO抑制率達到50%的濃度為18.36±1.20μg/mL。
　　（2）F3經(jīng)TLC分離出F3-1～F3-8八個組分，均具較好的抗炎、抗癌活性，其誘導(dǎo)QR活性達到倍增的濃度范圍在1.59±0.09～28.3±

5、0.02μg/mL，抑制NO達到50%的濃度范圍在11.9±1.39～51.85±5.25μg/mL。液相色譜分析表明F3-5和F3-8兩個組分物質(zhì)組成較為單一。
　　（3）對F3-5和F3-8經(jīng)半制備色譜分離獲得兩個單體組分F3-5-1和F3-8-1?；钚詼y定表明，F(xiàn)3-5-1抑制NO達到50%和誘導(dǎo)QR活性達到倍增的濃度分別為50.25±1.18μg/mL、22.50±0.39μg/mL,而F3-8-1抑制NO達到50%和誘導(dǎo)

6、QR活性達到倍增的濃度分別為30.11±3.13μg/mL、47.08±0.21μg/mL。
　　3、多穗柯抗炎、抗癌活性雙功能單體組分的結(jié)構(gòu)鑒定
　　對從多穗柯中分離到的組分F3-5-1和F3-8-1分別進行高分辨率質(zhì)譜及核磁共振分析，結(jié)果表明F3-5-1具有色原酮的基本母核結(jié)構(gòu)，推測為秦皮乙素；F3-8-1為催吐蘿芙木葉醇，是一種倍半萜類物質(zhì)。
　　4、多穗柯活性組分抗炎及抗癌作用機理的研究
　　抗炎方面，利

7、用LPS誘導(dǎo)小鼠巨噬細胞RAW264.7體外炎癥模型，研究不同濃度的催吐蘿芙木葉醇對RAW264.7細胞中炎癥因子TNF-α和iNOS表達的影響。結(jié)果顯示：采用不同濃度催吐蘿芙木葉醇處理細胞24 h后，細胞中TNF-α和iNOS蛋白表達量隨樣品濃度升高而減少，并呈劑量依賴關(guān)系，說明催吐蘿芙木葉醇在RAW264.7細胞中能通過抑制細胞炎癥因子TNF-α和iNOS的蛋白表達發(fā)揮抗炎功能。
　　抗癌方面，利用小鼠肝癌細胞Hepa1c1c