登革病毒Ⅱ型誘導(dǎo)原代人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性變化機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：初步探討登革病毒Ⅱ型（Dengue virus type2，DENV-2）感染人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞（Primery human dermal microvascular endothelial cells,pHDMECs）通透性變化的機(jī)制。
　　方法：利用103 TCID50的DENV-2感染pHDMECs；于4，8，12，24及48h用Real time-PCR和RT-PCR檢測DENV-2 NS1部分序列，免疫熒光法和流

2、式細(xì)胞術(shù)檢測DENV-2 NS1蛋白的表達(dá)，反映DENV-2對(duì)pHDMECs感染情況；細(xì)胞接種于Transwell孔中，DENV-2感染后，各時(shí)間點(diǎn)檢測下室熒光值反映細(xì)胞通透性；流式細(xì)胞術(shù)檢測24，48和72h細(xì)胞凋亡；Real time-PCR和雙抗體夾心ELISA法檢測IL-6、IL-8及CXCL-11變化；Real time-PCR和流式細(xì)胞術(shù)檢測ICAM-1。
　　結(jié)果：DENV-2感染的pHDMECs中NS1基因部分序列

3、相對(duì)表達(dá)隨時(shí)間延長而增高，但在各時(shí)間點(diǎn)均未檢測到DENV-2 NS1蛋白；DENV-2感染的pHDMECs通透性在24h（熒光值：對(duì)照組62.6±17.6，接毒組95.8±11.8，P＞0.05）和48h（對(duì)照組36.2±8.8，接毒組68.5±9.2，P＜0.05）顯著升高，而其他時(shí)間點(diǎn)無顯著變化；pHDMECs被感染72h后凋亡也無明顯變化（凋亡率：對(duì)照組34.76％，接毒組35.73%，P＞0.05）；IL-6和CXCL-11 m

4、RNA相對(duì)表達(dá)在8h分別上調(diào)2.49±0.5倍和2.37〒0.31倍（P＜0.05），IL-8 mRNA在24h上調(diào)6.82±1.69倍（P＜0.05），而ICAM-1于各時(shí)間點(diǎn)無明顯變化；蛋白水平，對(duì)照組和感染組分泌的IL-6于8h分別為869.6±50.7pg/ml、1248.8±86.9pg/ml（P＜0.05）；IL-8于48h分別為967.6±156.6pg/ml、1331.0±86.3pg/ml（P＜0.05）；CXCL-1