髓系腫瘤中DNMT3A基因內(nèi)甲基化態(tài)勢(shì)的臨床研究.pdf

1、目的：檢測(cè)急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）、慢性髓系白血病（chronic myeloid leukemia，CML）和骨髓增生異常綜合征（myelodysplastic syndrome，MDS）患者及健康對(duì)照組標(biāo)本中DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3A基因（DNMT3A）基因內(nèi)差異性甲基化區(qū)域2（DMR2）甲基化態(tài)勢(shì)，并統(tǒng)計(jì)分析其臨床意義。
　　方法：應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR（real-time quantit

2、ative PCR，RQ-PCR）技術(shù)檢測(cè)56例AML患者及18例對(duì)照組中DNMT3A四種異構(gòu)體的表達(dá)，應(yīng)用定量甲基化特異性PCR（real-time quantitative methylation-specific PCR，RQ-MSP）技術(shù)檢測(cè)152例 AML、82例 CML、90例 MDS及18例健康對(duì)照組中骨髓單個(gè)核細(xì)胞的DNMT3A DMR2甲基化狀態(tài)，應(yīng)用亞硫酸氫鹽測(cè)序（bisulfite sequencing PCR，

3、PCR）技術(shù)分析DNMT3A DMR2區(qū)域的甲基化密度。
　　結(jié)果：AML、CML和 MDS患者較對(duì)照組中均存在不同程度的DNMT3A DMR2低甲基化。
　　① AML中DNMT3A DMR2甲基化
　　152例AML患者中，84例（55％）為DNMT3A DMR2低甲基化。隨機(jī)挑選的兩例高甲基化患者BSP測(cè)序結(jié)果示甲基化密度為72.41%和93.97%，兩例低甲基化患者甲基化密度為1.72%和3.88%，DNMT3

4、A DMR2高甲基化組的患者甲基化密度高于低甲基化組（隨機(jī)挑選的兩例對(duì)照組甲基化密度為60.34%和74.49%）。低甲基化與患者的年齡、性別、外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量、血小板計(jì)數(shù)、FAB分型、WHO分型及染色體核型無(wú)關(guān)（P>0.05）。DNMT3A DMR2低甲基化與DNMT3A基因、NPM1基因、FLT3基因、IDH1/2基因、C/EBPA基因、C/KIT基因、U2AF1基因以及RAS基因突變均無(wú)關(guān)（P>0.05）。DNMT3

5、A DMR2高甲基化組與低甲基化組患者經(jīng)誘導(dǎo)治療后的完全緩解率（CR）相似（分別為52.5%和48.3%）。DNMT3A DMR2低甲基化患者的總體生存時(shí)間（OS）明顯短于高甲基化患者（兩組患者中位生存時(shí)間分別為7個(gè)月和11個(gè)月，P=0.034）。在非M3患者（兩組患者中位生存時(shí)間分別為7個(gè)月和9個(gè)月，P=0.019）和核型正常患者（兩組患者中位生存時(shí)間分別為7個(gè)月和25個(gè)月，P=0.011）中，低甲基化患者的總體生存時(shí)間同樣短于高甲基

6、化患者。多因素分析顯示，在核型正常AML患者中，DNMT3A DMR2低甲基化是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后不良影響因素。DNMT3A四種異構(gòu)體的表達(dá)均與DNMT3A DMR2的甲基化無(wú)相關(guān)性。
　?、?CML中DNMT3A DMR2甲基化
　　82例CML患者中，60例（73%）為DNMT3A DMR2低甲基化，隨機(jī)挑選的兩例高甲基化患者BSP測(cè)序結(jié)果示甲基化密度為50.34%和37.16%，兩例低甲基化患者甲基化密度為2.07%和3.

7、02%。低甲基化與患者的年齡、性別、外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量、血小板計(jì)數(shù)以及核型分組無(wú)關(guān)（P>0.05）。慢性期、加速期、急變期患者DNMT3A DMR2低甲基化頻率分別為72%（46/64）、100%（5/5）、69%（9/13），三組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　?、?MDS中DNMT3A DMR2甲基化
　　90例MDS患者中，64例（71%）為DNMT3A DMR2低甲基化，隨機(jī)挑選的兩例高甲基化患者

8、BSP測(cè)序結(jié)果示甲基化密度為45.3%和51.7%，兩例低甲基化患者甲基化密度為0.49%和1.72%。低甲基化與患者的年齡、性別、外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量、血小板計(jì)數(shù)無(wú)關(guān)（P>0.05）。低甲基化與患者的WHO分型、核型危險(xiǎn)分級(jí)以及國(guó)際預(yù)后評(píng)分系統(tǒng)（IPSS）分組無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）， DNMT3A DMR2低甲基化與DNMT3A基因、IDH1/2基因、U2AF1基因、SF3B1基因突變均無(wú)關(guān)（P>0.05）。盡管DNMT3