P53在不同高溫條件下相反作用的分子機(jī)制研究.pdf

1、抑癌基因P53在DNA損傷下激活，誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯進(jìn)行損傷修復(fù)，或促進(jìn)細(xì)胞凋亡，從而保持基因組DNA的穩(wěn)定性。已有研究顯示41.5℃以上高溫處理所引起的細(xì)胞凋亡依賴(lài)于P53。令人吃驚的是，我們最新發(fā)現(xiàn):在40℃條件下，P53具有促進(jìn)細(xì)胞存活的作用，進(jìn)一步研究表明，P53通過(guò)抑制HSF1和HSC70的表達(dá)，進(jìn)而抑制分子伴侶介導(dǎo)的自噬(CMA)來(lái)保護(hù)細(xì)胞免于死亡。因此，本論文將研究為什么激活的P53在不同高溫條件下卻起著相反的作用。

2、　　本論文以一對(duì)P53野生型和缺陷型近等結(jié)腸癌細(xì)胞系(HCT116)為實(shí)驗(yàn)材料，探討了P53在不同高溫條件下不同作用的分子機(jī)制，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:DNA損傷應(yīng)激反應(yīng)及ATM是否被激活，是43℃和40℃高溫處理的最重要區(qū)別。在43℃處理下，ATM被激活，導(dǎo)致P53 ser6磷酸化增加而P53 ser15磷酸化沒(méi)有變化，同時(shí)P53蛋白大量積累，促進(jìn)凋亡基因表達(dá)，從而引起細(xì)胞凋亡。當(dāng)敲低ATM時(shí)，P53蛋白積累降低伴隨P53 ser6磷酸化減少，

3、細(xì)胞存活率增加，而在HCT116 P53-/中，敲低ATM對(duì)細(xì)胞存活率沒(méi)有顯著影響。在40℃條件下，ATM沒(méi)有被激活，敲低ATM，對(duì)P53積累沒(méi)有顯著的影響，同時(shí)對(duì)HCT116P53+/+和P53-/-之間細(xì)胞存活的差異也無(wú)顯著影響;但過(guò)表達(dá)ATM可以模擬43℃處理，大大提高P53+/+在40℃下的死亡率，而對(duì)P53-/-細(xì)胞沒(méi)有顯著影響。另一方面，在40℃下，敲低HSP90會(huì)顯著降低P53的積累，同時(shí)降低了HCT116 P53+/+和

4、P53-/-之間細(xì)胞存活的差異。以上研究結(jié)果揭示了P53在不同高溫條件卻起著相反作用的分子機(jī)制:在43℃的高溫條件下，會(huì)產(chǎn)生DNA損傷，進(jìn)而激活A(yù)TM，ATM介導(dǎo)P53在不同位點(diǎn)磷酸化，被修飾的P53特異誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;在40℃的高溫條件下，并未發(fā)生嚴(yán)重的DNA損傷，ATM未被激活，ATM所依賴(lài)的P53修飾很少發(fā)生，P53蛋白是通過(guò)HSP90來(lái)穩(wěn)定的，此時(shí)的P53只對(duì)HSF1起抑制作用，不能激活細(xì)胞凋亡基因表達(dá)，所以只抑制CMA，不誘導(dǎo)細(xì)