p53靶基因Rap2B對(duì)腫瘤細(xì)胞骨架的調(diào)節(jié)作用及其分子機(jī)制.pdf

1、目的：探討p53靶基因Rap2B對(duì)腫瘤細(xì)胞骨架的調(diào)節(jié)作用及其分子機(jī)制，探索Rap2B在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用及其具體機(jī)制。
　　方法：熒光顯微鏡下觀察U2OS細(xì)胞pcDNA3、pcDNA3-Myc-Rap2B、pcDNA3-Myc-Rap2B(C180A)三種質(zhì)粒分別與pcDNA3-EGFP共轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的形態(tài)變化;Western Blot檢測(cè)H1299(p53-null)和U2OS(wild-type p53)細(xì)胞加入nocoda

2、zole后對(duì)Rap2B及p53表達(dá)的影響;流式細(xì)胞儀檢測(cè)nocodazole對(duì)H1299和U2OS細(xì)胞周期的影響;Western Blot檢測(cè)Rap2B對(duì)H1299和U2OS細(xì)胞周期蛋白Cyclin B1、Cyclin D1、Cyclin D3的影響;流式細(xì)胞儀檢測(cè)Rap2B對(duì)H1299和U2OS細(xì)胞周期的影響;Western Blot檢測(cè)U2OS細(xì)胞nocodazole同步化后釋放p53、Rap2B和Cyclin B1的表達(dá);免疫熒光

3、法F-actin染色熒光顯微鏡下觀察Rap2B對(duì)U2OS細(xì)胞骨架的影響;免疫熒光法DAPI染色在熒光顯微鏡下觀察Rap2B對(duì)U2OS細(xì)胞核的影響;免疫熒光法α-tublin染色熒光顯微鏡下觀察Rap2B對(duì)U2OS細(xì)胞骨架的影響。
　　結(jié)果：1）Rap2B過(guò)表達(dá)抑制腫瘤細(xì)胞鋪展;2）nocodazole誘導(dǎo)p53及依賴p53誘導(dǎo)的Rap2B蛋白的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);3) nocodazole誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞G2/M期

4、阻滯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);4) Rap2B對(duì)腫瘤細(xì)胞細(xì)胞周期無(wú)影響，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;5）Rap2B并非細(xì)胞周期蛋白，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);6）Rap2B通過(guò)調(diào)節(jié)F-actin抑制腫瘤細(xì)胞鋪展;7）Rap2B保護(hù)細(xì)胞核的完整性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);8) Rap2B通過(guò)調(diào)節(jié)α-tublin影響細(xì)胞骨架。
　　結(jié)論：nocodazole誘導(dǎo)依賴p53的Rap2B激活后，通過(guò)與細(xì)胞