p53在MVC感染致靶細(xì)胞WRD凋亡中的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：MVC（Minute Virus of canine）是博卡病毒的一種，課題組早期研究發(fā)現(xiàn)MVC感染其嗜性細(xì)胞WRD(Walter Reed Dog)后會引發(fā)DNA損傷、細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞周期阻滯，但是到目前為止，其所致凋亡的具體途徑并不完全清楚。因此，本文通過研究MVC感染W(wǎng)RD后p53及其下游各個(gè)靶基因表達(dá)變化、p53抑制劑干預(yù)作用，以此探究p53基因在MVC感染致靶細(xì)胞凋亡中的分子機(jī)制。
　　方法：首先觀察博卡病毒MVC

2、感染W(wǎng)RD細(xì)胞后細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上的改變；通過TUNEL法分析MVC感染W(wǎng)RD細(xì)胞所誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡；通過檢測細(xì)胞活力及流式細(xì)胞儀分析，觀察p53抑制劑在病毒感染中細(xì)胞活力及靶細(xì)胞凋亡所起到的作用；在確認(rèn)p53在凋亡中的作用后，通過PCR以及Real-time PCR來分析p53在mRNA水平的變化；通過蛋白免疫印跡法檢測 P53蛋白水平表達(dá)變化，同時(shí)分析其磷酸化水平以及下游的P21、FAS-L表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果：1.通過TUN

3、EL法觀察到MVC感染的細(xì)胞中有明顯的細(xì)胞凋亡小體形成；2. Real-time PCR結(jié)果顯示，p53 mRNA表達(dá)量在MVC感染后12h明顯上升，與此同時(shí)，P53蛋白免疫印跡結(jié)果與PCR結(jié)果一致；3. P53-Ser15和P21的表達(dá)量均隨著感染時(shí)間的增加呈現(xiàn)一定的增強(qiáng)，F(xiàn)AS-L的表達(dá)量并沒有出現(xiàn)明顯的變化。4.細(xì)胞活力檢測結(jié)果顯示：p53抑制劑干預(yù)組的細(xì)胞活力高于未干預(yù)組；5.流式細(xì)胞分析顯示p53抑制劑降低了MVC誘導(dǎo)的靶細(xì)胞