3-甲基腺嘌呤對(duì)急進(jìn)高原大鼠腸上皮細(xì)胞損傷自噬影響的研究.pdf

1、目的：探討自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤（3-MA）對(duì)急進(jìn)高原缺氧大鼠腸上皮細(xì)胞自噬水平及損傷程度的影響。
　　方法：以體重在180-280克，年齡在6-9周的50只健康雄性Wis ter大鼠作為研究對(duì)象，隨機(jī)分成：A組（對(duì)照組），B組（急進(jìn)高原缺氧24 h組），C組（急進(jìn)高原缺氧24h3-MA組），D組（急進(jìn)高原缺氧48 h組），E組（急進(jìn)高原缺氧48h3-MA組）。除A組外，其余4組在海拔高度5000 m低壓氧艙環(huán)境下建立急進(jìn)高原缺

2、氧大鼠腸上皮細(xì)胞損傷模型，預(yù)先篩選出自噬抑制劑3-MA的最佳作用濃度，并于模型建立前半小時(shí)給予C組、E組腹腔注射該濃度的3-MA（20 mg/k g，溶于1ml生理鹽水中），同時(shí)給予A組、B組、D組腹腔注射1 ml0.9％生理鹽水，肉眼觀察各組大鼠的行為學(xué)改變，HE染色分析大鼠腸組織的損傷程度，透射電鏡觀察自噬體結(jié)構(gòu)的表達(dá)，免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白（LC-3、Bec lin-1）的表達(dá)，RT-PCR方法檢測(cè)（LC-3、Becli

3、n-1）mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：⑴3-MA在濃度為20mg/k g具有明顯的腸上皮細(xì)胞自噬抑制作用；⑵腸組織病理?yè)p傷級(jí)別評(píng)分示：A組大鼠腸組織基本正常（腸道病理?yè)p傷級(jí)別得分為1.1±0.3）；與A組相比，B-E組大鼠腸組織均有不同程度的病理性損傷（腸道病理?yè)p傷級(jí)別得分分別為3.1±0.6、4.5±0.5、2.6±0.5、3.8±0.4），且差異顯著（P<0.05）；3-MA組（C、E組）較模型組（B、D組）腸組織的病理性損

4、傷級(jí)別明顯增加（P<0.01）；⑶透射電鏡下可見(jiàn)：模型組（B、D組）腸上皮細(xì)胞均可見(jiàn)自噬體結(jié)構(gòu)，而3-MA組（C、E組）自噬體這種雙層膜結(jié)構(gòu)小體的數(shù)量則相對(duì)明顯減少；⑷RT-PCR及免疫組化結(jié)果提示：與平原組相比，模型組LC-3、Beclin-1自噬相關(guān)蛋白及 mRNA表達(dá)均明顯上調(diào)（P<0.05）；而與模型組相比，3-MA組 LC-3、Bec lin-1蛋白和 mRN A表達(dá)均顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　結(jié)