高良姜干預Ⅱ型糖尿病有效部位的制備及表征.pdf

1、糖尿病(diabetes mellitus，DM)是以血糖升高為主要表現(xiàn)的累及全身的代謝性疾病，其中以胰島素分泌相對不足和外周胰島素抵抗為特點的2型糖尿病(type2 diabetesmellitus，T2DM)為主。隨著糖尿病新的作用機制的不斷發(fā)現(xiàn)，抗糖尿病藥物作用也從刺激胰島素分泌降低血糖，向調(diào)節(jié)血脂、改善胰島素抵抗、緩解并發(fā)癥以及抑制細胞凋亡等多方位綜合治療的方向發(fā)展。高良姜(Alpinia officinarum Hance，A

2、OH)具溫胃散寒之功效，有調(diào)節(jié)人體能量代謝的作用，在代謝病的治療上可能有其自身的特點。為此，本實驗對高良姜的兩類主要成分進行了富集，并鑒定其結構，分析其含量，考察其對T2DM的干預作用。
　　主要研究內(nèi)容如下:
　　1.高良姜降血糖有效部位的篩選
　　采用口服葡萄糖2.5 g/kg建立葡萄糖急性高血糖小鼠模型，觀察高良姜乙醇提取物大孔吸附樹脂各洗脫部位預防性給藥7天對小鼠血糖水平的影響。研究結果顯示，模型組小鼠在造模后

3、30min、60min血糖水平顯著升高，高良姜大孔吸附樹脂80％的乙醇洗脫部位給藥7天后，該組小鼠在造模后血糖-時間曲線下面積(AUC)明顯減小，表現(xiàn)出一定的降血糖作用，表明大孔吸附樹脂80％的乙醇洗脫部位是高良姜降血糖的有效部位。
　　2.高良姜降血糖有效部位化學成分的分離及鑒定
　　利用各種柱色譜分離技術，對高良姜大孔吸附樹脂80％的乙醇洗脫部位中的化學成分進行分離純化，利用1H-NMR、13C-NMR等波譜技術對分離得

4、到的化合物進行結構鑒定。從中分離鑒定出了5個化學成分，分別為5-羥基-7-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-1-苯基-3-庚酮(DPHA)、高良姜素(Galangin)、山柰素（Kaempfride）、7-（4-羥基-3-甲氧基苯基）-1-苯基-4-烯-3-庚酮(DPHB)和1，7-二苯基-5-羥基-3-庚酮(DPHC)。
　　3.高良姜降血糖有效部位的制備
　　3.1 高良姜提取工藝的優(yōu)化
　　以上述5個主要化學成分的含

5、量為指標，考察乙醇濃度、提取時間、提取次數(shù)和料液比4個影響因素，采用多成分綜合評分法優(yōu)選高良姜的醇提工藝。結果發(fā)現(xiàn)，提取次數(shù)對高良姜的提取工藝有顯著性影響，優(yōu)選出的提取工藝為:加10倍量80％乙醇，提取3次，每次1h，5個主要化學成分的提取率均能達到90％以上。結果表明，多成分綜合評分法能科學合理的優(yōu)化高良姜提取工藝，優(yōu)選出的提取工藝能對高良姜藥材進行較完全地提取，該工藝穩(wěn)定可行。
　　3.2 高良姜有效部位純化工藝的優(yōu)化

6、　　以5個主要化學成分含量為指標，考察大孔吸附樹脂的純化條件，優(yōu)選最佳的純化工藝。設立中試放大實驗，驗證有效部位純化工藝的穩(wěn)定性和可行性，同時制備中試有效部位(AOH-Z)用于T2DM小鼠的藥效學研究，并用高效液相色譜法對有效部位中主要化學成分進行含量測定。研究表明，AB-8型大孔吸附樹脂適宜高良姜中化學成分的純化，優(yōu)選出的大孔吸附樹脂純化工藝為: AB-8型樹脂與生藥量的質量比為:1∶1.5，提取液減壓濃縮到原提取液體積的約3/8，上

7、樣流速控制在6BV/h，分別用40％、80％、95％的乙醇洗脫，洗脫流速12BV/h，80％的洗脫部位即為高良姜治療糖尿病的有效部位。中試放大實驗表明，該純化工藝穩(wěn)定可行，中試有效部位中5個主要化學成分的含量分別為:DPHA21.3％、Galangin12.3％、Kaempfride2.6％、DPHB4.9％、DPHC19.5％，其總含量占該有效部位的57.9％。
　　4.高良姜有效部位對2型糖尿病小鼠的干預作用
　　以隨機

8、血糖水平、糖耐量作為評價指標，采用高脂飼料復合STZ-煙堿誘導的T2DM小鼠模型，研究AOH-Z對T2DM小鼠的干預作用，以確定AOH-Z干預T2DM的藥效作用以及有效劑量。在此基礎上，利用db/db自發(fā)性糖尿病小鼠模型進一步研究AOH-Z對T2DM小鼠糖代謝和脂代謝的影響，檢測相關糖脂代謝參數(shù)，并觀察AOH-Z對T2DM小鼠肝臟、腎臟和胰腺病理組織的影響。
　　4.1 高良姜有效部位對高脂飼料復合STZ-煙堿誘導的T2DM小鼠模

9、型的影響
　　在4周的給藥期內(nèi)，高脂飼料復合STZ-煙堿誘導的T2DM小鼠體重逐漸增加，造模后血糖水平均顯著升高，AOH-Z給藥組能降低模型小鼠的隨機血糖水平，且降糖作用呈現(xiàn)劑量依賴性關系，其中AOH-Z高劑量組（200mg/kg）有顯著地降低血糖水平的作用，并能提高小鼠的糖耐量。
　　4.2 高良姜有效部位對db/db自發(fā)性糖尿病小鼠模型的影響
　　在給藥期間可以觀察到db/db模型組小鼠的體重、攝食量和攝水量均顯著