2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、研究背景:舌鱗狀細(xì)胞癌(簡(jiǎn)稱舌鱗癌)(TSCC)是最常見(jiàn)的口腔頜面部惡性腫瘤,多發(fā)生于舌緣,因舌體具有豐富的淋巴、血液循環(huán)且舌的機(jī)械運(yùn)動(dòng)頻繁,舌鱗癌往往快速生長(zhǎng),呈現(xiàn)出浸潤(rùn)性強(qiáng)、惡性程度高、頸淋巴結(jié)早期轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)。盡管采用手術(shù)、放療及化療的綜合治療,舌鱗癌患者的五年生存率仍未有顯著改善,且化療極易產(chǎn)生耐藥,最終導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)。白花丹素是植物白花丹的根莖提取物,具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗癌等作用,而白花丹素對(duì)舌鱗癌的具體作用及機(jī)制尚不明確。

2、細(xì)胞培養(yǎng)穩(wěn)定同位素標(biāo)記(SILAC)技術(shù)具有高效標(biāo)記、定量精確等優(yōu)點(diǎn),是定量蛋白質(zhì)組學(xué)的金標(biāo)準(zhǔn),能夠系統(tǒng)揭示某一藥物作用于腫瘤細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)全組蛋白的表達(dá)改變以及相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)控變化。
  研究目的:本研究旨在通過(guò)SILAC定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)揭示白花丹素殺傷舌鱗癌細(xì)胞的作用及其相關(guān)分子機(jī)制,并進(jìn)一步探討白花丹素對(duì)舌鱗癌基礎(chǔ)化療藥物順鉑的增敏作用及機(jī)制。
  材料和方法:
  1.人舌鱗癌SCC25和CAL27細(xì)胞以及正

3、常人牙齦成纖維細(xì)胞HGF-1。
  2. MTT法檢測(cè)白花丹素對(duì)SCC25、CAL27、HGF-1細(xì)胞的殺傷抑制作用及半數(shù)抑制濃度IC50。
  3. MTT法檢測(cè)白花丹素對(duì)化療藥物順鉑的增敏作用。
  4. SILAC定量蛋白質(zhì)組學(xué)檢測(cè)白花丹素作用于舌鱗癌細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)全組蛋白的表達(dá)改變以及相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)控變化。
  5.集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)白花丹素和/或順鉑作用于舌鱗癌細(xì)胞后細(xì)胞集落的形成情況。
  6.

4、PI流式細(xì)胞法檢測(cè)白花丹素和/或順鉑作用于舌鱗癌細(xì)胞后細(xì)胞周期的分布情況。
  7. Annexin V: PE流式細(xì)胞法檢測(cè)白花丹素和/或順鉑作用于舌鱗癌細(xì)胞后細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)情況。
  8. Cyto ID流式細(xì)胞法檢測(cè)白花丹素和/或順鉑作用于舌鱗癌細(xì)胞后細(xì)胞自噬的誘導(dǎo)情況。
  9.共聚焦熒光顯微鏡檢測(cè)白花丹素作用于舌鱗癌細(xì)胞后細(xì)胞自噬的誘導(dǎo)情況。
  10. CM-H2DCFDA法檢測(cè)白花丹素作用于舌鱗癌細(xì)

5、胞后細(xì)胞內(nèi)活性氧水平。
  11. Western blotting法檢測(cè)白花丹素作用于舌鱗癌細(xì)胞后上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及腫瘤干細(xì)胞樣特性蛋白的表達(dá)情況。
  12. Western blotting法檢測(cè)白花丹素和/或順鉑作用于舌鱗癌細(xì)胞后信號(hào)通路蛋白的表達(dá)情況。
  結(jié)果:
  1.白花丹素作用后舌鱗癌細(xì)胞內(nèi)全組蛋白及信號(hào)通路的改變
 ?。?)白花丹素作用12、24、48和72 hr后,舌鱗癌SCC25細(xì)胞的I

6、C50分別為14.8、8.4、7.4、4.3μM;CAL27細(xì)胞的IC50分別為8.7、3.1、2.2、1.2μM;正常牙齦成纖維細(xì)胞HGF-1的IC50分別為35.7、29.9、17.4、8.1μM。
 ?。?)SILAC定量蛋白質(zhì)組學(xué)結(jié)果發(fā)現(xiàn)白花丹素能夠引起SCC25細(xì)胞中398種蛋白分子、101條信號(hào)通路的改變及 CAL27細(xì)胞中354種蛋白分子、100條信號(hào)通路的改變。
  2.白花丹素誘導(dǎo)舌鱗癌細(xì)胞周期阻滯、凋亡與

7、自噬的作用及機(jī)制
 ?。?)白花丹素以濃度/時(shí)間依賴的方式抑制SCC25、CAL27細(xì)胞集落形成。
 ?。?)白花丹素以濃度/時(shí)間依賴的方式誘導(dǎo)SCC25和CAL27細(xì)胞G2/M期阻滯。細(xì)胞周期蛋白 cdc2、cyclin B1、Cdc25C的表達(dá)水平下降,而 p53、p27和p21的表達(dá)水平升高。
 ?。?)白花丹素以濃度/時(shí)間依賴的方式誘導(dǎo)SCC25和CAL27細(xì)胞凋亡。細(xì)胞凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL的表達(dá)水

8、平下降,而Bax、PUMA、Cytochrome C、FADD、TRADD、DR5、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的表達(dá)水平升高。
 ?。?)白花丹素以濃度/時(shí)間依賴的方式誘導(dǎo)SCC25和CAL27細(xì)胞自噬。細(xì)胞自噬蛋白Beclin1表達(dá)水平升高,且LC3-II/LC3-I的比值上升。
 ?。?)較白花丹素單獨(dú)作用組,白花丹素分別聯(lián)合 SB202190、Doxorubicin作用時(shí),舌

9、鱗癌細(xì)胞凋亡與自噬水平升高;白花丹素分別聯(lián)合Chloroquine、Z-VAD(OMe)-FMK作用時(shí),舌鱗癌細(xì)胞凋亡與自噬水平下降;白花丹素分別聯(lián)合EGFR、Anisomysin、PA作用時(shí),舌鱗癌細(xì)胞凋亡與自噬水平下降。
 ?。?)白花丹素作用后,舌鱗癌SCC25、CAL27細(xì)胞中的p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR及p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值均有不同程度的下降。
  3

10、.白花丹素抑制舌鱗癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及腫瘤干細(xì)胞樣特性的作用及機(jī)制
 ?。?)白花丹素能夠顯著誘導(dǎo)舌鱗癌SCC25、CAL27細(xì)胞活性氧生成且該作用可被活性氧清除劑NAC、GSH阻斷。
 ?。?)白花丹素作用后,舌鱗癌SCC25、CAL27細(xì)胞中p-p38 MAPK/p38 MAPK、n-Nrf2/c-Nrf2的比值及抗氧化反應(yīng)元件NQO1、GST、HSP90蛋白的表達(dá)均下降。
 ?。?)白花丹素能夠抑制舌鱗癌細(xì)胞上皮

11、間質(zhì)轉(zhuǎn)化,在SCC25、CAL27細(xì)胞中,與空白對(duì)照相較,E-cadherin/N-cadherin的比值均升高。
 ?。?)白花丹素作用后,舌鱗癌SCC25、CAL27細(xì)胞中的腫瘤干細(xì)胞樣特性蛋白Oct-4、Bmi-1、Nanog、Sox-2的表達(dá)水平下降。
 ?。?)當(dāng)白花丹素聯(lián)合 NAC、GSH作用時(shí),較白花丹素單獨(dú)作用組,舌鱗癌SCC25、CAL27細(xì)胞的G2/M期、凋亡、自噬百分比均下降,而EMT及腫瘤干細(xì)胞樣特性

12、蛋白的表達(dá)水平升高。
  4.白花丹素對(duì)舌鱗癌細(xì)胞順鉑化療增敏的作用及機(jī)制
 ?。?)在SCC25細(xì)胞中,當(dāng)順鉑單獨(dú)作用時(shí),其IC50為2.937μM,當(dāng)順鉑聯(lián)合5μM白花丹素作用時(shí),IC50為0.634μM;在CAL27細(xì)胞中,當(dāng)順鉑單獨(dú)作用時(shí),其IC50為23.33μM,當(dāng)順鉑聯(lián)合1μM白花丹素作用時(shí),IC50為10.31μM。
 ?。?)當(dāng)順鉑聯(lián)合白花丹素作用時(shí),較順鉑單獨(dú)作用組,SCC25、CAL27細(xì)胞中的集

13、落形成率均有不同程度的下降。
 ?。?)當(dāng)順鉑聯(lián)合白花丹素作用時(shí),較順鉑單獨(dú)作用組,SCC25、CAL27細(xì)胞G2/M期細(xì)胞百分比均有不同程度的升高。
 ?。?)當(dāng)順鉑聯(lián)合白花丹素作用時(shí),較順鉑單獨(dú)作用組,SCC25、CAL27細(xì)胞凋亡百分比均有不同程度的升高。
 ?。?)當(dāng)順鉑聯(lián)合白花丹素作用時(shí),較順鉑單獨(dú)作用組,SCC25、CAL27細(xì)胞自噬百分比均有不同程度的升高。
 ?。?)白當(dāng)順鉑聯(lián)合白花丹素作用時(shí),較

14、順鉑單獨(dú)作用組,SCC25、CAL27細(xì)胞中p-p38 MAPK/p38 MAPK、n-Nrf2/c-Nrf2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR的比值均有不同水平的下降。
  結(jié)論:
  1.白花丹素能夠有效抑制舌鱗癌細(xì)胞的增殖活性,而不影響正常牙齦成纖維細(xì)胞的增殖;白花丹素能夠廣泛調(diào)控舌鱗癌細(xì)胞的細(xì)胞周期、凋亡、自噬、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及氧化還原狀態(tài)。
  2.白花丹素能夠以濃度/時(shí)間依賴

15、的方式抑制舌鱗癌細(xì)胞集落形成并且誘導(dǎo)細(xì)胞G2/M期阻滯;白花丹素通過(guò)抑制PI3K/Akt/mTOR及p38 MAPK信號(hào)通路誘導(dǎo)舌鱗癌細(xì)胞凋亡與自噬;白花丹素誘導(dǎo)的舌鱗癌細(xì)胞凋亡與自噬之間存在相互促進(jìn)作用。
  3.白花丹素通過(guò)抑制p38 MAPK/Nrf2信號(hào)通路誘導(dǎo)舌鱗癌細(xì)胞產(chǎn)生大量活性氧;白花丹素能夠顯著抑制舌鱗癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及腫瘤干細(xì)胞樣特性;白花丹素誘導(dǎo)的活性氧參與調(diào)控舌鱗癌細(xì)胞的G2/M期阻滯、凋亡與自噬誘導(dǎo)及上皮

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