藍(lán)莓花青素對(duì)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)大鼠HSC-T6活化、增殖的影響及其機(jī)制.pdf

1、目的：探討從藍(lán)莓中提取的花青素對(duì)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)大鼠肝星狀細(xì)胞（Hepatic stellate cell，HSC）-T6活化、增殖的抑制作用及其機(jī)制。
　　方法：
　　1、以HSC-T6細(xì)胞為受試細(xì)胞，分成對(duì)照組和葡萄糖氧化酶組（Glucose oxidase,GO組）（100 U/L、200 U/L、300 U/L、400 U/L、500 U/L、600 U/L），分別干預(yù)2、3、4h后，采用噻唑藍(lán)法（MTT）檢測(cè)HSC-T

2、6增殖情況，以確定GO誘導(dǎo)HSC-T6活化的最佳濃度和時(shí)間；
　　2、將HSC-T6細(xì)胞分成對(duì)照組、氧化應(yīng)激組（100U/L GO）、氧化應(yīng)激+藍(lán)莓花青素組，其中藍(lán)莓花青素濃度分別為200、400、600、800μg/ml，預(yù)先干預(yù)24h后再加GO，通過(guò)MTT法檢測(cè)藍(lán)莓花青素抑制氧化應(yīng)激誘導(dǎo)HSC-T6增殖的最適濃度；
　　3、根據(jù)MTT結(jié)果，將HSC-T6分成對(duì)照組、氧化應(yīng)激組（GO100U/L）、藍(lán)莓花青素干預(yù)組（藍(lán)莓花

3、青素600μg/ml+GO100U/L）。倒臵顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)；細(xì)胞免疫化學(xué)法檢測(cè)各組HSC-T6中α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(Smooth muscle actin aphla，α-SMA)表達(dá)；ELISA法檢測(cè)各組HSC-T6胞漿中I型膠原(Collagen type I,Col I)含量；硫代巴比妥酸法、羥胺法和微量酶標(biāo)法分別檢測(cè)各組HSC-T6胞漿中丙二醛（Malonaldehyde,MDA）含量、超氧化物歧化酶（Superoxid

4、e dismutase,SOD）活性和谷胱甘肽（Glutathione,GSH）含量；實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time PCR）分析各組HSC-T6 Nrf2 mRNA的表達(dá)，細(xì)胞免疫化學(xué)法觀察各組HSC-T6細(xì)胞胞核中Nrf2的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、除100U/L GO外，其余各濃度GO的HSC-T6細(xì)胞存活率較對(duì)照組均降低（P<0.05），100U/L GO干預(yù)2、3、4h后，細(xì)胞存活率分別為110％、111

5、.88%、102.18%，與相應(yīng)對(duì)照組比，作用2、3h有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），其中100U/L GO干預(yù)3h，HSC-T6增殖效果更加顯著（P<0.05），故選擇該條件進(jìn)行模型復(fù)制。
　　2、與氧化應(yīng)激組比，除600μg/ml和800μg/ml藍(lán)莓花青素外，其余各濃度藍(lán)莓花青素組的HSC-T6細(xì)胞存活率均顯著升高，但采用600μg/ml和800μg/ml藍(lán)莓花青素干預(yù)24h后，其HSC-T6細(xì)胞增殖明顯受抑制，其抑制率分

6、別為21%、39.1%，均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；與對(duì)照組比，800μg/ml藍(lán)莓花青素組HSC-T6存活率降低（P<0.05）,而600μg/ml藍(lán)莓花青素組HSC-T6存活率相當(dāng)，故選取600μg/ml藍(lán)莓花青素作為抑制GO誘導(dǎo)HSC-T6細(xì)胞活化、增殖的有效濃度。
　　3、對(duì)照組HSC-T6形態(tài)不規(guī)則，呈多角或長(zhǎng)條形，細(xì)胞生長(zhǎng)稀疏，胞體細(xì)長(zhǎng)；氧化應(yīng)激組HSC-T6較對(duì)照組生長(zhǎng)致密、呈梭形或長(zhǎng)形，細(xì)胞體積明顯增大、胞

7、漿致密；而藍(lán)莓花青素干預(yù)組HSC-T6較氧化應(yīng)激組生長(zhǎng)明顯受抑制、細(xì)胞呈細(xì)條形或多角形、胞體明顯減小。與對(duì)照組比，氧化應(yīng)激組HSC-T6α-SMA表達(dá)強(qiáng)度和分泌ColⅠ水平明顯增強(qiáng)（P<0.05）；與氧化應(yīng)激組比，藍(lán)莓花青素干預(yù)組HSC-T6α-SMA表達(dá)強(qiáng)度和分泌ColⅠ水平顯著降低（P<0.05）。與對(duì)照組比，氧化應(yīng)激組HSC-T6胞漿中MDA含量顯著升高（P<0.05），而SOD活力和GSH含量顯著降低（P<0.05）；與氧化應(yīng)激

8、組比，藍(lán)莓花青素干預(yù)組HSC-T6胞漿中MDA含量顯著降低（P<0.05），而SOD活力和GSH含量顯著升高（P<0.05）。與對(duì)照組比，氧化應(yīng)激組HSC-T6 Nrf2 mRNA表達(dá)增高（P<0.05），HSC-T6總Nrf2蛋白水平兩組相當(dāng)（P>0.05)，但分布于胞核的Nrf2蛋白水平明顯高于對(duì)照組（P<0.05）；與氧化應(yīng)激組比，藍(lán)莓花青素干預(yù)組HSC-T6 Nrf2 mRNA和總的Nrf2蛋白水平均顯著增高（P均<0.05），