大麻素CB2受體激動(dòng)劑AM1241對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞系HSC-T6的影響及其機(jī)制.pdf

1、目的：探討大麻素CB2受體激動(dòng)劑AM1241對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞系HSC-T6的影響及其機(jī)制。
　　方法:1、噻唑藍(lán)法分別檢測(cè)（0、20、50、80umol/L）AM1241和（0、10、20、30、40umol/L）AM630干預(yù)24h下HSC-T6的存活率，根據(jù)實(shí)驗(yàn)所測(cè)得的細(xì)胞存活率選擇最佳的用藥濃度。2、將HSC-T6分成對(duì)照組、氧化應(yīng)激組、AM1241(20、80 umol/L)干預(yù)組共四組。對(duì)照組用低糖（Dulbecco’s

2、 modification of Eagle’s medium Dulbecco,DMEM)完全培養(yǎng)液正常培養(yǎng)2h，氧化應(yīng)激組用含葡萄糖氧化酶（100mU/L）低糖DMEM完全培養(yǎng)液培養(yǎng)2 h，AM1241干預(yù)組分別加入20、80 umol/L的AM1241干預(yù)3 h后，再加入葡萄糖氧化酶（100 mU/L）干預(yù)2 h。細(xì)胞免疫化學(xué)染色法觀察各組HSC-T6胞漿中α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA

3、)的表達(dá)情況；收集各組HSC-T6的培養(yǎng)液上清，離心之后，ELISA檢測(cè)上清液中的Ι型膠原(type colcollagenΙ,ColⅠ)的含量；檢測(cè)HSC-T6裂解液中丙二醛（ malondialdehyde,MDA）、超氧歧化酶（superoxide dismutase,SOD）的含量；Western blot檢測(cè)HSC-T6中核轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子(nuclear factor erythroid-2 related factor2, N

4、rf2)總蛋白與核蛋白含量。3、將HSC-T6分成對(duì)照組、氧化應(yīng)激組、AM1241干預(yù)組、AM1241+AM630拮抗組共四組。對(duì)照組用低糖DMEM完全培養(yǎng)液正常培養(yǎng)12h，氧化應(yīng)激組用含100mU/L的葡萄糖氧化酶的低糖DMEM完全培養(yǎng)液培養(yǎng)12h；AM1241干預(yù)組用含50umol/L AM1241的低糖DMEM完全培養(yǎng)液培養(yǎng)12h，AM1241+AM630拮抗組用大麻素CB2受體拮抗劑20umol/L AM630干預(yù)2h后，再用含

5、50umol/L AM1241的低糖DMEM完全培養(yǎng)液培養(yǎng)12h；ELISA法檢測(cè)各組HSC-T6培養(yǎng)液上清ColⅠ和Ⅲ型膠原(type ColcollagenⅢ,ColⅢ）的含量；檢測(cè)各組HSC-T6裂解液中谷胱甘肽（glutathione,GSH)的含量；Western blot法分別檢測(cè)HSC-T6中大麻素型Ⅱ受體（Cannabinoid Receptor2,CB2)、Nrf2、血紅素加氧酶1(hemeoxygenase-1,HO

6、-1)的蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果：1、（20、50、80umol/L）AM1241干預(yù)組HSC-T6的存活率依次降低，與0umol/L AM1241干預(yù)組相比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05)，AM630各濃度組對(duì)HSC-T6的存活率無明顯作用（p>0.05)。2、對(duì)照組HSC- T6胞質(zhì)中無明顯α-SMA表達(dá)，氧化應(yīng)激組α-SMA明顯表達(dá)，與氧化應(yīng)激組比較，AM1241（20、80 umol/L）干預(yù)組HSC-T6胞質(zhì)α-SMA表達(dá)

7、有所下降（p<0.05）；與對(duì)照組比較，氧化應(yīng)激組HSC-T6細(xì)胞培養(yǎng)上清中Col I含量升高（ p<0.05），與氧化應(yīng)激組比較， AM1241（20、80 umol/L）干預(yù)組HSC-T6細(xì)胞培養(yǎng)上清中Col I含量明顯下降(p<0.05)。氧化應(yīng)激組HSC-T6較對(duì)照組HSC-T6中MDA含量上升，SOD活性明顯下降（p<0.05），與氧化應(yīng)激組比較，AM1241（20、80 umol/L）干預(yù)組HSC-T6細(xì)胞MDA含量下降，S

8、OD活性明顯上升（p<0.05）；對(duì)照組、氧化應(yīng)激組、AM1241（20、80umol/L）干預(yù)組HSC-T6細(xì)胞中Nrf2總蛋白表達(dá)量無明顯差異（p>0.05)；AM1241（20、80 umol/L）干預(yù)組Nrf2核蛋白表達(dá)量比氧化應(yīng)激組明顯增多（p<0.05）。3、與對(duì)照組相比，氧化應(yīng)激組HSC-T6的細(xì)胞外基質(zhì)ColⅠ、ColⅢ的表達(dá)量明顯升高（p<0.05)，AM1241干預(yù)組HSC-T6的細(xì)胞外基質(zhì)ColⅠ、ColⅢ的表達(dá)較

9、氧化應(yīng)激組明顯減低（ p<0.05)，而AM1241+AM630干預(yù)組HSC-T6 ColⅠ、ColⅢ的含量比AM1241干預(yù)組明顯增高（p<0.05），與氧化應(yīng)激組相比無明顯差異；與對(duì)照組相比，氧化應(yīng)激組HSC-T6中的GSH含量有所升高（p<0.05），AM1241干預(yù)組HSC-T6中的GSH含量較氧化應(yīng)激組相比有所升高，而AM1241+AM630拮抗組HSC-T6中GSH的含量較AM1241干預(yù)組明顯下降（p<0.05)，與氧化應(yīng)

10、激組無明顯差異；對(duì)照組、氧化應(yīng)激組、AM1241干預(yù)組、AM630+AM1241拮抗組HSC-T6中CB2的蛋白有所表達(dá)，與比對(duì)照組相比，AM1241干預(yù)組CB2的表達(dá)有所增高（p<0.05)；氧化應(yīng)激組、AM1241干預(yù)組HSC-T6中Nrf2、HO-1的蛋白表達(dá)比對(duì)照組均明顯增高， AM1241干預(yù)組增高更為明顯，而AM630+AM1241拮抗組的Nrf2、HO-1的蛋白表達(dá)明顯低于AM1241干預(yù)組（p<0.05），與氧化應(yīng)激組無