以上市藥物為物質(zhì)基礎(chǔ)的抗絲狀病毒和抗尼帕病毒的藥物發(fā)現(xiàn).pdf

1、絲狀病毒(fi loviruses)和尼帕病毒(Nipah Virus，NiV)均屬于危害人類健康和公共安全的高致病病毒。病毒感染人后會(huì)導(dǎo)致出血熱和嚴(yán)重腦炎，其特點(diǎn)為發(fā)病快，致死率高，且現(xiàn)尚無(wú)藥物或疫苗。研發(fā)針對(duì)上述兩類病毒治療藥物不但可以援助非洲和東南亞疫情多發(fā)地區(qū)，而且對(duì)我國(guó)也是必要的藥物儲(chǔ)備。
　　絲狀病毒包括埃博拉病毒(Ebola virus，EBOV)和馬爾堡病毒(Marburg virus，MARV)，可分別引起埃博拉

2、出血熱(Ebola hemorrhagic fever，EHF)和馬爾堡出血熱(Marburg hemorrhagic fever，MHF)，其中EHF致命性更強(qiáng)。NiV引起的嚴(yán)重病毒性腦炎和呼吸系統(tǒng)疾病致死率也比較高。由于兩類病毒的高危險(xiǎn)性，其活病毒實(shí)驗(yàn)需要生物安全級(jí)別4級(jí)(Biosafety Level4，BSL-4)實(shí)驗(yàn)條件，嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)條件限制了其抗病毒藥效學(xué)評(píng)價(jià)。
　　絲狀病毒和尼帕病毒屬于囊膜病毒，其囊膜源于宿主細(xì)胞膜，

3、其主要成分是脂質(zhì)和蛋白。囊膜糖蛋白參與病毒侵入宿主細(xì)胞過(guò)程:首先囊膜糖蛋白識(shí)別宿主細(xì)胞表面受體并與之結(jié)合，之后囊膜與宿主細(xì)胞融合，進(jìn)而引發(fā)病毒后續(xù)感染過(guò)程。絲狀病毒表面包膜糖蛋白(glycoprotein，GP)是介導(dǎo)其侵入的唯一糖蛋白;NiV介導(dǎo)該過(guò)程的蛋白有兩個(gè):G和F蛋白。病毒進(jìn)入細(xì)胞是病毒入侵的第一步，因此阻斷該過(guò)程可有效抑制病毒感染。
　　藥物重定位在抗感染藥物研發(fā)中的應(yīng)用被廣泛認(rèn)可，由于已上市藥物安全性和不良反應(yīng)均已明

4、確，且生產(chǎn)工藝成熟，因此以其為物質(zhì)基礎(chǔ)有可能實(shí)現(xiàn)在較短時(shí)間內(nèi)找到可用于臨床的抗絲狀病毒藥物和抗尼帕病毒藥物。假病毒技術(shù)是用于研究高危病毒的經(jīng)典方法。本論文應(yīng)用該技術(shù)，制備了以絲狀病毒表面糖蛋白(Glycoprotein，GP)為外殼蛋白包裹HIV-1-luc核心的假病毒，包括扎伊爾型埃博拉病毒（ZEBOV-GP/HIV-1-luc）、蘇丹型埃博拉病毒（SEBOV-GP/HIV-1-luc）和馬爾堡病毒（MARV-GP/HIV-1-luc

5、），以及以尼帕病毒表面糖蛋白F(Nipah virus glycoproteinF，NiV-F)和G(Nipah virus glycoprotein G，NiV-G)為外殼蛋白包裹HIV-1-luc核心的假病毒(NiV-F-G/HIV-1-luc)。然后應(yīng)用上述假病毒在BSL-2實(shí)驗(yàn)室對(duì)已上市藥物庫(kù)進(jìn)行評(píng)價(jià)，旨在發(fā)現(xiàn)絲狀病毒進(jìn)入抑制劑和尼帕病毒進(jìn)入抑制劑。
　　本論文首先應(yīng)用ZEBOV-GP/HIV-1-luc模型篩選了840個(gè)

6、已上市藥物，結(jié)果顯示，有12個(gè)性激素類藥物可抑制ZEBOV-GP/HIV-1-luc感染，其中IC50＜1μmol·L-1的藥物有3個(gè)，分別是枸櫞酸托瑞米芬(IC50:0.19±0.02μrmol·L-1)、枸櫞酸他莫昔芬(IC50:0.32±0.01umol·L-1)和枸櫞酸克羅米芬(IC50:0.53±0.02μmol·L-1)。IC50介于1μmol·L-1～10μmol·L-1的藥物有7個(gè)，分別是雌二醇苯甲酸酯(IC50:1.8

7、3±5.69μmol·L-1)、鹽酸雷洛昔芬(IC50:3.48±0.07μmol·L-1)、馬烯雌酮(IC50:4.00±9.94μmol·L-1)、雌二醇(IC50:5.26±9.92μmol·L-1)、炔雌醚(IC50:6.36±5.37μmol·L-1)、雌激素酮(IC50:6.87±0.03μmol·L-1)及非那雄胺(IC50:9.94±0.45μmol·L-1)。此外，己烷雌酚(IC50:14.20±0.55μmol·L-

8、1)和醋酸氯地孕酮(IC50:24.60±0.36μmol·L-1)也有弱活性。進(jìn)一步應(yīng)用SEBOV-GP/HIV-1-luc和MARV-GP/HIV-1-luc評(píng)價(jià)上述藥物對(duì)其抑制活性，結(jié)果顯示，枸櫞酸托瑞米芬、枸櫞酸他莫昔芬、枸櫞酸克羅米芬、鹽酸雷洛昔芬以及炔雌醚對(duì)絲狀病毒SEBOV-GP/HIV-1-luc和MARV-GP/HIV-1-luc也有抑制作用。
　　本論文還評(píng)價(jià)了1300個(gè)已上市藥物抗尼帕病毒活性。應(yīng)用NiV-F

9、-G/HIV-1-luc感染高表達(dá)ephrin-B2(EFNB2)的293T細(xì)胞，并在感染前加入受試藥物，通過(guò)檢測(cè)被感染細(xì)胞中報(bào)告基因表達(dá)水平評(píng)價(jià)病毒的感染程度。結(jié)果顯示，1300個(gè)已上市藥物中無(wú)尼帕病毒進(jìn)入抑制劑。
　　綜上所述，本論文在BSL-2實(shí)驗(yàn)室條件下應(yīng)用假病毒技術(shù)通過(guò)制備絲狀病毒和尼帕病毒，在細(xì)胞水平分別評(píng)價(jià)了840個(gè)和1300個(gè)已上市藥物抗絲狀病毒和抗尼帕病毒活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了5個(gè)性激素類藥物對(duì)絲狀病毒具有廣譜抑制活性