抗乙型肝炎病毒藥物靶標的篩選和驗證.pdf

1、乙型肝炎病毒(HBV)感染是世界范圍的嚴重公共衛(wèi)生問題之一，但是目前沒有特效防治方法，存在的關鍵問題在于HBV基因組較小，易發(fā)生突變，限制了靶向病毒的抗病毒藥物的發(fā)展。最近的研究表明，抑制宿主細胞中某些蛋白的功能可以阻斷病毒感染。與病毒基因組相比，人類基因組序列中可能包括更多與病毒復制有關的基因。應用DNA微陣列(芯片)技術系統(tǒng)分析宿主基因表達，是一種從宿主細胞中發(fā)現(xiàn)潛在抗病毒靶標的有效方法。因此，本課題旨在應用基因芯片技術篩選和驗證宿

2、主細胞內(nèi)潛在的抗HBV藥物作用靶標，為新型抗病毒藥物的篩選奠定基礎。 本研究利用人類全基因組芯片比較了HepG2.2.15細胞與HepG2細胞表達譜差異，并研究了HepG2．2．15細胞經(jīng)抗HBV藥物干預前后細胞基因表達譜變化情況，篩選出在HBV感染后差異表達、而藥物干預后表達逆轉(zhuǎn)的基因，獲得了可能的HBV感染關鍵分子。通過RT-PCR、Western印跡技術驗證以及生物信息學分析發(fā)現(xiàn)ABHD2、EREG、ACVR2B、CDC3

3、4、KHDRBS3、RORA可能成為肝細胞內(nèi)潛在的抗HBV藥物作用靶標。在此基礎上，應用反義技術等途徑抑制肝細胞中上述基因的表達或功能，發(fā)現(xiàn)只有當ABHD2、EREG的表達受到抑制時，HepG2．2．15細胞內(nèi)HBV的復制才受到明顯抑制，為證明ABHD2和EREG成為抗HBV藥物作用靶點的可能性提供了有力證據(jù)。由于多靶點聯(lián)合治療已逐漸成為抗乙型肝炎病毒治療中的熱點，在前期工作的基礎上將以前篩選出的抗HBV感染的作用靶標ASGPR、Fib