異丙景糖酐抗乙型肝炎病毒的研究.pdf

1、第一部分：異丙景糖酐抗乙型肝炎病毒的體外實驗研究。 目的：通過觀察異丙景糖酐作用后，HepG2.2.15細胞分泌HBV標(biāo)志物的變化，探討異丙景糖酐在體外條件下對乙型肝炎病毒(HBV)的復(fù)制是否有直接的抑制作用。 方法：以不同濃度的異丙景糖酐溶液作用于HepG2.2.15細胞72小時(h)，以恩替卡韋(10μg/ml)作為陽性對照，以不含任何藥物的胎牛血清培養(yǎng)基為陰性對照；分別于藥物作用后24h、48h、72h取培養(yǎng)上清，

2、并于72h后提取細胞內(nèi)船V-DNA。用ABBOT試劑盒檢測培養(yǎng)上清中HBsAg,HBeAg的水平，用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法檢測細胞內(nèi)外HBV-DNA水平，以MTT法檢測細胞成活率。 結(jié)果：濃度為10μg/ml、40μg/ml、100μg/ml的異丙景糖酐溶液作用于HepG2.2.15細胞72小時后，細胞成活率分別為93.09％、91.12％、87.03％(P＞0.05)，組間比較無顯著差異，與陰性組比較亦無顯著差異。各

3、用藥組培養(yǎng)上清中的HBsAg、HBeAg及細胞內(nèi)外HBV-DNA水平較陰性組低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。用藥組之間比較，高濃度組上述指標(biāo)較低濃度組低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義；HBsAg、HBeAg及細胞內(nèi)外HBV-DNA的抑制率隨著藥物作用時間的延長而增加，高濃度組的抑制率高于低濃度組，藥物作用72h，各組(10μg/ml、40μg/ml、100μg/ml)HBsAg的抑制率分別為3.43％、6.38％、10.57％(P=0.137)；HBeA

4、g的抑制率分別為5.6％、13.8％、19.2％(P=0.660)；細胞內(nèi)HBV-DNA的抑制率分別為0.7％、2.4％、3.5％(P=0.679)，差異組間比較均無統(tǒng)計學(xué)意義。陽性對照(恩替卡韋)作用72h，培養(yǎng)上清HBsAg、HBeAg及細胞內(nèi)外HBV-DNA水平較陰性組有顯著下降。結(jié)論：濃度為10μg/ml、40μg/ml、100μg/ml的異丙景糖酐溶液對HepG2.2.15細胞無毒性作用，對HepG2.2.15細胞表達分泌HB

5、sAg、HBeAg及HBV-DNA無明顯的抑制作用。 第二部分：異丙景糖酐抗乙型肝炎病毒的臨床研究 目的：研究異丙景糖酐治療HBeAgm性慢性乙型肝炎(CHB)患者的療效和安全性，并進一步探討可能的抗HBV機制。 方法：將HBeAg陽性的CHB患者按1:1:1:1隨機分配至異丙景糖酐200mg、400mg和800mg組及對照組(甘露醇組)。用藥組給予相應(yīng)劑量的異丙景糖酐，對照組給予800mg甘露醇，療程12周。觀

6、察治療前后各組病毒學(xué)、生化學(xué)、血清學(xué)指標(biāo)和安全性指標(biāo)變化情況，血清細胞因子水平變化情況及不良反應(yīng)發(fā)生情況。 結(jié)果：治療12周后，異丙景糖酐800mg組的病毒應(yīng)答率為l8.75％，400mg組和200mg組的病毒應(yīng)答率均為12.5％，組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。800mg組使HBV-DNA水平平均下降(0.96±1.41)log10拷貝/ml，治療前后有顯著性差異(P=0.0006)；400mg組、200mg組和對照組HBV-DNA

7、水平分別平均下降(0.28±0.92)log10拷貝/ml、(0.48±1.19)log10拷貝/ml、(0.27±0.84)log10拷貝/ml，組間和組內(nèi)比較均無顯著性差異。HBeAg陰轉(zhuǎn)率、ALT復(fù)常率組間比較均無顯著性差異。最高劑量異丙景糖酐800mg療程12周對患者無明顯不良影響。研究中報道的不良事件主要表現(xiàn)為慢性乙肝肝功能異常。本項研究有一例嚴重不良事件發(fā)生，但是位于安慰劑組。 800mg組用藥后血清IFN-γ、TN

8、F-α、IL-2水平較用藥前升高，但IFN-γ水平治療前后差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，而TNF-α、IL-2水平治療前與治療后12周相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.015；0.023)。其余各組治療后上述細胞因子水平均較治療前有所升高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。比較各組治療12周與治療前各細胞因子水平的差值，800mg組IFN-γ、TNF-α、IL-2治療前后的差值均明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.03 1，0