鈍頂螺旋藻多糖抗乙型肝炎病毒的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究鈍頂螺旋藻多糖(polysacchrides of spirulina platensis,PSP)在乙型肝炎病毒基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞系HepG2 2.2.15中對(duì)細(xì)胞干擾素受體(IFN-αRmRNA)表達(dá)的調(diào)節(jié)作用;對(duì)HBeAg和HBsAg表達(dá)以及對(duì)HBV-DNA合成的抑制作用,為進(jìn)一步開發(fā)其做為抗乙肝病毒藥物提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù).方法:HepG2 2.2.15細(xì)胞經(jīng)胰酶消化后,以含10％胎牛血清的MEM培養(yǎng)液制成3×10<'5>個(gè)/

2、ml細(xì)胞懸液,加入96孔培養(yǎng)板中,每孔200μl,48h后更換液體,用含2%胎牛血清的MEM維持液稀釋PSP(其余成分與營(yíng)養(yǎng)液相同)至終濃度3200μg/ml、1600μg/ml,800μg/ml,400μg/ml、200 μg/ml,每孔200μl,每個(gè)濃度設(shè)6個(gè)復(fù)孔,并設(shè)不加藥對(duì)照組,置5%CO<,2>孵箱中37℃連續(xù)培養(yǎng)72h,采用四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT assay)、活細(xì)胞計(jì)數(shù)法觀察PSP對(duì)HepG2 2.2.15細(xì)胞毒作

3、用;將上述細(xì)胞接種于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板,48h換液,每孔加入含400μg/ml、200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml4個(gè)濃度PSP的MEM維持液1ml,每濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔,并設(shè)相應(yīng)細(xì)胞對(duì)照組,分別在24h、48h、72h、144h取細(xì)胞培養(yǎng)液上清,通過ELISA法(加定量標(biāo)準(zhǔn)品)定量檢測(cè)PSP對(duì)HepG2 2.2.15細(xì)胞HBsAg、HBeAg分泌的影響;實(shí)時(shí)FQ-PCR法定量檢測(cè)PSP對(duì)HBV-DNA合成的影響;分別將PSP

4、處理72h、144h的HepG2 2.2.15細(xì)胞涂片,原位雜交法檢測(cè)PSP對(duì)該細(xì)胞IFN-αRmRNA表達(dá)的影響.結(jié)論:無(wú)毒濃度PSP在HepG2 2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)中可有效地抑制細(xì)胞HBsAg、HBeAg的分泌以及HBV-DNA的合成,抑制作用有明顯的量效和時(shí)效反應(yīng)關(guān)系;PSP還能促進(jìn)細(xì)胞IFN-αRmRNA的表達(dá).實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:PSP既可通過提高機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答狀態(tài)又可直接抑制HBV抗原分泌及病毒DNA復(fù)制發(fā)揮其抗HBV組作用.