替芬泰抗乙型肝炎病毒的藥效研究.pdf

1、研究目的:研究替芬泰(TFT)抗乙型肝炎病毒（HBV）的體外藥效、耐藥基因及體內(nèi)藥效的影響，進(jìn)一步研究TFT抗HBV的活性作用。
　　研究方法:1.體外藥效實(shí)驗(yàn):在TFT最大無(wú)毒濃度(TC0)102μM下，觀察TFT不同濃度（102、51、25.5μM）、拉米夫定(218μM)及病毒對(duì)照組作用于(HepG2)2.2.15細(xì)胞，收集給藥4d、8d的細(xì)胞及細(xì)胞上清液，用PCR-熒光探針“一管法”檢測(cè)2.2.15細(xì)胞HBV-DNA載量;

2、ELISA法測(cè)定給藥8d時(shí)細(xì)胞上清液中HBsAg和HBeAg的含量。2.耐藥基因?qū)嶒?yàn):將不同濃度TFT(122.5、81.7、40.8μM)、ETV（1、0.1、0.01μM）、TFT和ETV聯(lián)合用藥（122.5μM+1μM、81.7μM+0.1μM、40.8+0.01μM）及病毒對(duì)照組作用于A64細(xì)胞，給藥4d，采用PCR-熒光探針“一管法”檢測(cè)細(xì)胞中HBV-DNA載量。另TFT（81.7、40.8、20.4μM）、ADV（100、1

3、0、1μM）和病毒對(duì)照組，將ADV耐藥(N236T)的質(zhì)粒加入HepG2細(xì)胞轉(zhuǎn)染，5h后加入藥液繼續(xù)培養(yǎng)。給藥4d，同法檢測(cè)細(xì)胞中HBV-DNA載量。3.體內(nèi)藥效研究:采用DHBV-DNA陽(yáng)性鴨血清感染雛鴨，設(shè)TFT50mg/kg、12.5 mg/kg，ETV1.5 mg/kg劑量組及鴨乙肝病毒感染對(duì)照組，共4組。經(jīng)灌胃給藥于T0、T10、T20，采用斑點(diǎn)雜交方法對(duì)鴨血清進(jìn)行DHBV-DNA檢測(cè);Southern-Blot雜交檢測(cè)TFT

4、對(duì)鴨肝臟組織內(nèi)DHBV-DNA的影響。
　　研究結(jié)果:1.TFT在給藥4d、8d對(duì)(HepG2)2.2.15細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞上清液中HBV-DNA都具有明顯的抑制作用。其TFT102μM組在給藥8d時(shí)對(duì)細(xì)胞內(nèi)和上清液的抑制率可達(dá)78.44％、43.15％，IC50為57.68μM;對(duì)該細(xì)胞所分泌的HBsAg和HBeAg都表現(xiàn)出一定的抑制作用，HBsAg抑制率高于HBeAg。2.TFT對(duì)A64細(xì)胞EC50值115.39μM，并且具有一定

5、的抑制病毒復(fù)制作用，TFT122.5μM抑制率53.05％;聯(lián)合用藥后效果顯著(P＜0.05)，抑制率63.00％、42.17％，產(chǎn)生聯(lián)合增效。TFT對(duì)ADV瞬轉(zhuǎn)耐藥細(xì)胞未產(chǎn)生耐藥;濃度在81.7μM對(duì)ADV瞬轉(zhuǎn)耐藥細(xì)胞HBV-DNA表達(dá)量抑制率為53.52％。3.在給藥T10、T20時(shí)TFT對(duì)鴨體內(nèi)血清DHBV-DNA的水平有明顯的抑制作用，尤其在T20時(shí)TFT50 mg/kg抑制率46.99％，有明顯的時(shí)效關(guān)系，與TFT12.5 m

6、g/kg有明顯的量效關(guān)系;檢測(cè)給藥T20的鴨肝臟組織內(nèi)DHBV-DNA水平，給藥組明顯低于病毒對(duì)照組，TFT50 mg/kg、12.5 mg/kg抑制率為52.08％、29.16％，說(shuō)明TFT對(duì)DHBV-DNA具有一定的抑制作用。
　　研究結(jié)論:1.TFT能明顯抑制(HepG2)2.2.15細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞上清液中的HBV-DNA的表達(dá)，對(duì)細(xì)胞分泌出的HBsAg以及HBeAg也具有抑制作用。2.TFT對(duì)耐藥株A64細(xì)胞及ADV瞬轉(zhuǎn)耐藥