葉酸干預(yù)對細胞轉(zhuǎn)錄組的影響及其抑制肝癌發(fā)生的研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一，它的發(fā)病率和死亡率均較高，臨床對其確切診斷主要集中于中晚期。因此，肝癌的早期預(yù)防是目前亟需關(guān)注的醫(yī)學(xué)問題。研究資料表明，表觀遺傳學(xué)修飾的紊亂在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程中起著很重要的作用。然而，葉酸作為甲基供體能夠通過表觀遺傳學(xué)修飾調(diào)控相關(guān)基因的表達，進而對腫瘤的發(fā)生起預(yù)防作用。在中國，人群血清葉酸水平普遍偏低。因此，補充葉酸能否預(yù)防腫瘤的發(fā)生，需要我們進一步去探討。在我們的研究中，首先檢測了不同濃度的葉酸對

2、培養(yǎng)6個月的人正常肝細胞QSG-7701生理功能上的影響。在明確了葉酸缺乏顯著刺激細胞的增殖、細胞由靜止期向分裂期的轉(zhuǎn)化以及細胞的遷移、侵襲的基礎(chǔ)上，我們的結(jié)果再一次證實了葉酸缺乏能夠?qū)е抡＜毎膼盒赞D(zhuǎn)化。補充葉酸則逆轉(zhuǎn)了這種現(xiàn)象的發(fā)生。但是在這些增殖、遷移和侵襲等能力改變的背后，葉酸究竟通過哪些基因發(fā)揮了作用，目前尚不明確。為此，我們選用了高通量轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)來篩選可能的相關(guān)差異mRNA分子。
　　通過轉(zhuǎn)錄組測序，最終篩選出了

3、受葉酸調(diào)控明顯的差異表達基因LCN2。癌基因LCN2可以促進細胞的增殖、細胞周期的阻滯、腫瘤的形成等等。然而，高葉酸培養(yǎng)的細胞卻可以抑制LCN2基因的表達，進而抑制腫瘤的發(fā)生。此外，在三組接受了不同濃度葉酸培養(yǎng)的人正常肝細胞的裸鼠的皮下成瘤實驗中，飼養(yǎng)高葉酸裸鼠的成瘤率在三組中是最低的，正常葉酸組次之，無葉酸組成瘤率最高。最后，在高葉酸培養(yǎng)的細胞中過表達LCN2基因之后，細胞的增殖速率增加;在無葉酸培養(yǎng)的細胞組中干擾LCN2基因后，細胞

4、的增殖速率減慢。然后在高葉酸培養(yǎng)的肝細胞中過表達LCN2基因后進行裸鼠皮下荷瘤，其成瘤率和無葉酸組裸鼠效果很接近，并且均高于其它兩組裸鼠的成瘤率。免疫蛋白印記(Western Blot)檢測發(fā)現(xiàn)，高葉酸可以促進整體組蛋白H3K9Me2甲基化水平的升高。染色質(zhì)免疫共沉淀進一步揭示了補充葉酸可以促進LCN2基因啟動子區(qū)組蛋白H3K9二甲基化水平的升高。并且LCN2基因在肝癌患者癌組織的表達水平普遍高于癌旁組織，癌組織中葉酸水平普遍低于癌旁組