腫瘤細(xì)胞葉酸受體表達(dá)上調(diào)及其對葉酸偶聯(lián)物攝取的影響.pdf

1、目前，利用葉酸進(jìn)行靶向治療或靶向成像的研究主要依賴于靶細(xì)胞表面表達(dá)足夠水平的葉酸受體（FR）。事實上，在成功應(yīng)用FR介導(dǎo)靶向治療的試驗動物模型中，腫瘤組織都表達(dá)最佳水平且均一的葉酸受體；對于人體腫瘤葉酸受體表達(dá)的結(jié)果顯示，葉酸受體在不同細(xì)胞中的表達(dá)存在較大差并且表達(dá)不均一。有關(guān)調(diào)節(jié)葉酸受體表達(dá)的研究顯示：轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)劑如全反式維甲酸、地塞米松（Dex）等可以選擇性上調(diào)葉酸受體陽性腫瘤細(xì)胞中FR的表達(dá)，受體調(diào)節(jié)劑無論單獨使用或與組蛋白脫乙?；?/p>

2、酶抑制劑聯(lián)合使用時，均可以在調(diào)節(jié)FR表達(dá)方面發(fā)揮效應(yīng)。
　　 本研究選擇地塞米松作為受體調(diào)節(jié)劑上調(diào)腫瘤細(xì)胞的FR-α表達(dá)；同時考察當(dāng)細(xì)胞表面FR-α表達(dá)上調(diào)后對細(xì)胞葉攝取酸偶聯(lián)載藥膠束的影響。
　　 1.地塞米松上調(diào)腫瘤細(xì)胞FR-α表達(dá)
　　 通過RT-PCR和Western Blot方法鑒定了三種腫瘤細(xì)胞FR-α表達(dá)情況，結(jié)果顯示：MCF-7為葉酸受體陰性腫瘤細(xì)胞；HeLa和SKOV-3為葉酸受體陽性腫瘤細(xì)胞。

3、選擇HeLa和SKOV-3作為考察受體調(diào)節(jié)和靶向攝取的實驗細(xì)胞，經(jīng)WST-1方法檢測，結(jié)果顯示：Dex使用劑量在5-100 nM范圍內(nèi)對實驗細(xì)胞增殖幾乎無影響。利用定量PCR和流式細(xì)胞儀分別檢測Dex對FOLRI基因表達(dá)的及細(xì)胞表面FR-α表達(dá)的上調(diào)作用。實驗結(jié)果顯示：Dex劑量在5-100 nM范圍對SKOV-3細(xì)胞中FOLRI基因表達(dá)上調(diào)近2倍，但對細(xì)胞表面蛋白FR-α的表達(dá)無明顯調(diào)節(jié)作用；相同劑量范圍Dex對HeLa細(xì)胞中FOLR

4、I基因表達(dá)上調(diào)超過2倍，同時細(xì)胞表面FR-α表達(dá)升高超過1倍。
　　 2.FR-α上調(diào)后腫瘤細(xì)胞對葉酸靶向的影響
　　 用熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀考察Heta細(xì)胞攝取葉酸偶聯(lián)膠束（FM）和普通膠束（M）的差異。結(jié)果顯示：HeLa細(xì)胞對FM攝取量高于M；且細(xì)胞對FM的攝取可以被1 mM游離葉酸抑制。表明FR參與了HeLa細(xì)胞對FM的攝取過程。同時比較調(diào)節(jié)FR-α表達(dá)前后對細(xì)胞攝取FM的影響：使用100 nM地塞米松預(yù)處理He