金黃色葡萄球菌α-toxin上調(diào)皮膚組織中Il-19的表達(dá)及其機(jī)制研究.pdf

1、尋常型銀屑病（以下簡稱銀屑?。┦浅Ｒ姷穆匝装Y性皮膚病，以皮損局部炎細(xì)胞浸潤和角質(zhì)形成細(xì)胞(Keratinocyte cell，KC)過度增殖為基本病理特征?，F(xiàn)階段對(duì)銀屑病發(fā)病機(jī)理的認(rèn)識(shí)尚不全面，目前比較確定的是:多種細(xì)胞因子表達(dá)水平的改變參與了銀屑病的發(fā)病機(jī)制，這些細(xì)胞因子包括IL-6、IL-8、IL-12、腫瘤壞死因子(Tumornecrosis factor，TNF)和干擾素吖(Intcrferon-γ，IFN-γ)，而IL-19

2、能夠上調(diào)上述細(xì)胞因子的表達(dá)。角質(zhì)形成細(xì)胞是IL-19的主要分泌來源，IL-19的上調(diào)可以誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞分泌角質(zhì)形成細(xì)胞生長因子（Keratinocyte growth factor，KGF）作用于角質(zhì)形成細(xì)胞使其增殖，從而加重銀屑病的病理損傷。IL-19在角質(zhì)形成細(xì)胞中的表達(dá)上調(diào)與另一重要的促炎癥細(xì)胞因子IL-1β的刺激有關(guān);另一方面，金黃色葡萄球菌感染能夠促進(jìn)中性粒細(xì)胞分泌促炎癥細(xì)胞因子IL-1β，Alpha毒素(α-toxin)

3、在其中發(fā)揮了重要作用，即IL-1β的表達(dá)上調(diào)可能與α-toxin的表達(dá)分泌有關(guān)。
　　越來越多的學(xué)者認(rèn)為金黃色葡萄球菌在皮膚表面的定植是誘發(fā)和加重銀屑病的重要影響因素。有研究證實(shí)50％以上的銀屑病患者的皮損部位可以檢測出金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，S.aureus），S.aureus的定植與高銀屑病皮損面積和嚴(yán)重程度評(píng)分(Psoriasis Area Severity Index，PASI)相關(guān)。S

4、.aureus可以分泌多種病原分子和毒素，進(jìn)而影響宿主的免疫系統(tǒng)和免疫穩(wěn)態(tài)。S.aureus分泌的α-toxin還能夠作用于角質(zhì)形成細(xì)胞，與特應(yīng)性皮炎(Atopic dermatitis，AD)的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。
　　推測α-toxin可能通過促進(jìn)中性粒細(xì)胞分泌IL-1β，進(jìn)而上調(diào)IL-19在銀屑病皮損中的表達(dá)，從而參與銀屑病的發(fā)生與發(fā)展。
　　目的:
　　本課題旨明確金黃色葡萄球菌分泌的α-toxin能否上調(diào)皮膚組

5、織中IL-19的表達(dá)，并初步探討其機(jī)制及與銀屑病的發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系，以進(jìn)一步明確銀屑病的發(fā)病機(jī)制。
　　方法:
　　1.實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR，qRT-PCR)檢測銀屑病皮損與正常皮膚組織中IL-19的mRNA水平，Western blotting分別檢測從正常皮膚組織和銀屑病皮損來源的金黃色葡萄球菌培養(yǎng)上清中α-toxin的表達(dá)。相關(guān)性分析銀屑病皮損中IL-19的表達(dá)水平

6、與金黃色葡萄球菌分泌α-toxin水平是否相關(guān)。
　　2.采用金黃色葡萄球菌α-toxin缺失菌株(△Hla S.aureus)，野生型金黃色葡萄球菌(WT S.aureus)，以及PBS感染BALB/c小鼠背部皮膚，收集感染后的皮膚組織，H&E染色觀察組織炎癥程度病理變化，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測IL-19，IL-1β的mRNA水平，ELISA檢測IL-19，IL-1β的蛋白表達(dá)水平。分離小鼠骨髓的中性粒細(xì)胞，用△Hla S.au

7、reus和WT S.aureus刺激6h后，實(shí)時(shí)熒光定量PCR、ELISA和Western blotting檢測IL-1β的表達(dá)。不同濃度IL-1β刺激PAM2-12角質(zhì)形成細(xì)胞后，實(shí)時(shí)熒光定量PCR和ELISA檢測IL-19的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.銀屑病皮損IL-19 mRNA水平顯著高于在正常皮膚組織IL-19 mRNA水平(1.708±0.1610VS0.5679±0.0978,P＜0.05)。
　　2.銀

8、屑病皮損中金黃色葡萄球菌檢出率顯著高于正常皮膚組織(P＜0.05);銀屑病患者組分離的金黃色葡萄球菌產(chǎn)α-toxin的陽性率顯著高于正常皮膚組(P＜0.05)。
　　3.銀屑病皮損中IL-19的表達(dá)與金黃色葡萄球菌α-toxin的分泌呈正相關(guān)(r=0.7999，P＜0.0001)
　　4.WT S.aureus組與△Hla S.aureus組相比，前者皮損的面積增加，炎癥細(xì)胞浸潤和膿腫形成增加。
　　5.實(shí)時(shí)熒光定量P

9、CR和ELISA檢測發(fā)現(xiàn)△Hla S.aureus組IL-19和IL-1β的mRNA和蛋白水平，相較于WT S.aureus組顯著降低(P＜0.01)。
　　6.中性粒細(xì)胞in vitro刺激發(fā)現(xiàn)，△Hla S.aureus組IL-1β蛋白表達(dá)水平相較于WT S.aureus組顯著降低(P＜0.01)。
　　7.IL-1β in vitro刺激PAM2-12角質(zhì)形成細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，IL-19的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯