BD0801靶向VEGF-VEGFR路徑體外抑制人HCC細(xì)胞株Be17402增殖和抗血管生成作用的研究.pdf

1、目的:
　　研究人源化抗VEGF單克隆抗體BD0801單藥及其聯(lián)合氟尿嘧啶(5-Fluorouracil，5-FU)/奧沙利鉑(oxaliplatin，OXA)體外對(duì)人肝細(xì)胞癌(HCC)細(xì)胞株Bel7402增殖和人微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HMEC-1)形成血管的抑制作用。
　　方法:
　　應(yīng)用不同濃度BD0801單藥或BD0801聯(lián)合5-FU/OXA體外作用于Bel7402和HMEC-1細(xì)胞，以貝伐單抗(Bevacizumab

2、，Bev)為陽(yáng)性對(duì)照藥，采用四甲基偶氮唑藍(lán)比色法(MTT)測(cè)定細(xì)胞增殖抑制率;DAPI染色熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡形態(tài);流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡率和周期分布;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)水平變化;蛋白印跡法(Western blot)檢測(cè)細(xì)胞VEGF、pVEGFR蛋白表達(dá)水平變化;體外細(xì)胞劃痕和Transwell共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)觀察藥

3、物對(duì)HMEC-1細(xì)胞遷移能力的影響;通過(guò)體外管腔形成實(shí)驗(yàn)，觀察藥物對(duì)HMEC-1體外管腔形成能力的影響。
　　結(jié)果:
　　1、BD0801通過(guò)抑制VEGF/VEGFR通路活性而抑制Bel7402和HMEC-1細(xì)胞增殖，且能有效誘導(dǎo)兩株細(xì)胞凋亡、阻滯細(xì)胞周期。BD0801能降低兩株細(xì)胞培養(yǎng)液中VEGF水平，并對(duì)HMEC-1細(xì)胞遷移及管腔形成能力有一定抑制作用。
　　2、與單藥作用比較，BD0801聯(lián)合5-FU/OXA可顯

4、著增強(qiáng)抑制Bel7402和HEMC-1細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用，使S期細(xì)胞比例上升，并增強(qiáng)抑制VEGF/VEGFR通路活性作用，同時(shí)可增強(qiáng)抑制HMEC-1遷移及管腔形成。
　　3、與Bev單藥或聯(lián)合5-FU/OXA相比，BD0801單藥或聯(lián)合5-FU/OXA能更有效地抑制Bel7402和HMEC-1細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及抑制VEGF/VEGFR通路活性，并能更有效地抑制HMEC-1遷移和管腔形成能力。
　　結(jié)論:

5、　　BD0801體外通過(guò)靶向VEGF/VEGFR路徑抑制HCC細(xì)胞Bel7402和內(nèi)皮細(xì)胞HMEC-1生長(zhǎng)、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、阻滯細(xì)胞周期，并能抑制HMEC-1細(xì)胞遷移和管腔形成。與單藥作用相比，BD0801聯(lián)合細(xì)胞毒藥物5-FU/OXA體外通過(guò)靶向VEGF/VEGFR路徑增強(qiáng)抑制HCC細(xì)胞Bel7402和內(nèi)皮細(xì)胞HMEC-1生長(zhǎng)、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、阻滯細(xì)胞周期，并能增強(qiáng)抑制HMEC-1細(xì)胞遷移和管腔形成。與Bev相比，BD0801的上述生物學(xué)