L-PGDS與內(nèi)脂素在人股動(dòng)脈粥樣硬化斑塊組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、研究背景與目的：
　　外周動(dòng)脈疾?。≒eripheral arterial disease,PAD）中，下肢動(dòng)脈粥樣硬化閉塞性疾?。╨ower extremity atherosclerotic disease, LEAD）被認(rèn)為是除冠狀動(dòng)脈及腦血管系統(tǒng)外的外周大動(dòng)脈閉塞而導(dǎo)致的疾病過程，最常見的原因就是動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis,AS）?，F(xiàn)如今隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)和人民生活水平的不斷提高，伴隨著人口的不斷老齡化、工作及

2、生活壓力的增大、吸煙及大量富含脂肪及膽固醇食物的攝入等各種生活習(xí)慣的改變，致使動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病率呈逐年升高的趨勢(shì)。LEAD是指由于下肢動(dòng)脈發(fā)生粥樣硬化導(dǎo)致的下肢動(dòng)脈狹窄甚至是閉塞，下肢動(dòng)脈供血不足或中斷而出現(xiàn)的下肢組織慢性或急性缺血癥狀的疾病，是周圍動(dòng)脈疾病的重要組成部分。隨著病情的進(jìn)展可轉(zhuǎn)變?yōu)殚]塞性動(dòng)脈硬化癥，其具有發(fā)病率高、致殘率高、治愈率低等特點(diǎn)。高血壓、糖尿病往往也是此病的促發(fā)因素。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于下肢動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的發(fā)病機(jī)

3、制主要有炎癥學(xué)說、脂質(zhì)浸潤(rùn)學(xué)說、血管中膜平滑肌細(xì)胞激活及內(nèi)膜損傷理論、血小板聚集和血栓形成學(xué)說等，其中脂質(zhì)浸潤(rùn)及炎癥學(xué)說備受關(guān)注。目前，對(duì)于下肢動(dòng)脈粥樣硬化的治療方法主要有藥物保守治療，手術(shù)治療，干細(xì)胞移植治療并同時(shí)控制血糖及血壓等原發(fā)性疾病。通過積極采取上述治療方式，通?？刹煌潭鹊母纳苹颊呦轮毖陌Y狀，但是其遠(yuǎn)期治療效果及復(fù)發(fā)率仍較高。所以深入研究動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制，延緩動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生及發(fā)展，以求更有效的進(jìn)行預(yù)防下肢動(dòng)脈粥

4、樣硬化閉塞癥的發(fā)生以及更早期診斷及制定更為有效、科學(xué)的治療方法，減少患者痛苦，提高患者的日后生活質(zhì)量，成為目前廣受關(guān)注的問題。
　　越來越多的研究表明脂肪組織與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展有著密切關(guān)系，脂肪組織能否分泌多種脂肪因子，其中內(nèi)脂素（Visfatin）是一種重要的脂肪細(xì)胞因子，其能促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶-9(Matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)等合成，并提高其生物活性，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化有重要的促進(jìn)作用，與

5、心腦血管疾病及周圍血管疾病有著密切關(guān)系。脂質(zhì)運(yùn)載型前列腺D合成酶（1ipocalintype prostaglandin Dsynthase，L-PGDS）是脂質(zhì)運(yùn)載蛋白超家族的成員，目前體液中有關(guān) L-PGDS的定量研究顯示，哺乳動(dòng)物 L-PGDS的含量在腦脊液、精液含量最高，其次為尿液、血漿。其主要作用有催化前列腺素H2（PGH2）轉(zhuǎn)變成前列腺素 D2（PGD2）的作用，PGD2具有抑制炎性細(xì)胞和炎性因子黏附及抑制血小板聚集從而起到

6、抗血栓形成的作用。有相關(guān)研究也初步表明 L-PGDS具有間接拮抗COX的作用，間接起到抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。本實(shí)驗(yàn)采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶連反應(yīng)（Real-time PCR）和免疫組織化學(xué)法觀察人股AS斑塊中內(nèi)脂素及L-PGDS的表達(dá)及二者的相關(guān)性，探討其表達(dá)水平的變化與人股AS及斑塊穩(wěn)定性之間的關(guān)系，旨在為臨床預(yù)防和治療外周動(dòng)脈粥樣硬化性疾病提供新的治療靶點(diǎn)。
　　材料及方法：
　　1.收集鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院血管外科2012年

7、4月至2014年7月股AS斑塊剝脫術(shù)中獲取的內(nèi)膜標(biāo)本32例，男21例，女11例，年齡34～72歲，平均（53.37±11.81）歲。15例普外科手術(shù)切除的脾動(dòng)脈及腸系膜動(dòng)脈標(biāo)本（對(duì)照組），男11例，女4例，年齡36～75歲，平均（49.36±11.01）歲。對(duì)照組術(shù)前均排除患有癥狀性 AS、近期腦卒中（病史<3個(gè)月）；近期急性心肌梗死（病史<3個(gè)月）；感染，糖尿病、心腦血管疾病、肝、腎腫瘤等慢性疾病及傳染病，甲狀腺功能亢進(jìn)及減低；近期服

8、用降糖、調(diào)脂及降壓藥物者。并確保所取標(biāo)本動(dòng)脈壁三層結(jié)構(gòu)的完整性。每位受試患者均被告知其科研用途并簽訂知情同意書。術(shù)中獲取標(biāo)本去除周圍組織后立即液氮保存?zhèn)錂z。
　　2.所取標(biāo)本進(jìn)行HE染色，按病理分類標(biāo)準(zhǔn)將股動(dòng)脈粥樣硬化斑塊分為兩組：穩(wěn)定斑塊組（18例）、不穩(wěn)定斑塊組（14例）。15例外科手術(shù)切除的脾動(dòng)脈、腸系膜動(dòng)脈標(biāo)本作為對(duì)照組。
　　3.利用免疫組織化學(xué)法測(cè)定股動(dòng)脈粥樣硬化斑塊組與對(duì)照組中內(nèi)脂素與L-PGDS蛋白的表達(dá)情況

9、，分析內(nèi)脂素與L-PGDS蛋白表達(dá)的變化與股動(dòng)脈粥樣硬化之間的關(guān)系，并觀察兩種蛋白之間是否有相關(guān)性。
　　4.利用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶連反應(yīng)（Reverse Transcription-PCR）檢測(cè)股AS斑塊組織和正常動(dòng)脈組織中內(nèi)脂素、L-PGDS mRNA的表達(dá)，從基因?qū)用娣治鰞烧適RNA表達(dá)的變化與動(dòng)脈粥樣硬化的意義，并分析兩者之間的關(guān)系。
　　5.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0進(jìn)行分析，股動(dòng)脈粥樣硬化斑塊2組及對(duì)照組內(nèi)脂素和

10、L-PGDS蛋白和mRNA表達(dá)的比較應(yīng)用單因素方差分析和LSD-T法檢驗(yàn)，應(yīng)用Spearson相關(guān)分析內(nèi)脂素和L-PGDS蛋白及mRNA表達(dá)的關(guān)系，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果：
　　一．免疫組織化學(xué)染色結(jié)果：
　　1.內(nèi)脂素蛋白在股動(dòng)脈粥樣硬化斑塊組中均有較高表達(dá)，于對(duì)照組中低表達(dá)。動(dòng)脈粥樣硬化板塊中內(nèi)脂素蛋白棕褐色顆粒表達(dá)陽(yáng)性區(qū)主要集中在炎性細(xì)胞浸潤(rùn)區(qū)域，且多集中于細(xì)胞質(zhì)中。內(nèi)脂素蛋白表達(dá)量不穩(wěn)定斑塊組明顯高于

11、對(duì)照組（P<0.01）；穩(wěn)定斑塊組內(nèi)脂素蛋白表達(dá)量也明顯高于對(duì)照組（P<0.01）；不穩(wěn)定斑塊組則明顯高于穩(wěn)定斑塊組（P<0.01）；三組中內(nèi)脂素蛋白表達(dá)量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=76.586，P<0.01）。
　　2.L-PGDS蛋白于動(dòng)脈粥樣硬化斑塊組低表達(dá)，于對(duì)照組表達(dá)較高。L-PGDS蛋白棕褐色顆粒主要表達(dá)于動(dòng)脈內(nèi)膜區(qū)及斑塊炎性細(xì)胞浸潤(rùn)區(qū)。L-PGDS蛋白表達(dá)量于穩(wěn)定斑塊組明顯低于對(duì)照組（P<0.01）；不穩(wěn)定斑塊組L-P

12、GDS蛋白表達(dá)量也明顯低于對(duì)照組（P<0.01）；不穩(wěn)定斑塊組則明顯低于穩(wěn)定斑塊組（P<0.01）；三組中L-PGDS蛋白表達(dá)量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=17.439，P<0.01）。
　　3.應(yīng)用Spearson相關(guān)性分析觀察股AS斑塊中內(nèi)脂素與L-PGDSD蛋白表達(dá)的相關(guān)性，穩(wěn)定斑塊組中內(nèi)脂素和 L-PGDS蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.664，P=0.003），不穩(wěn)定斑塊組中內(nèi)脂素和L-PGDS蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.534

13、，P=0.049）。
　　二．RT-PCR結(jié)果：
　　1.內(nèi)脂素 mRNA表達(dá)量于不穩(wěn)定斑塊組明顯高于對(duì)照組（P<0.01）；穩(wěn)定斑塊組內(nèi)脂素mRNA表達(dá)量也明顯高于對(duì)照組（P<0.01）；不穩(wěn)定斑塊組則明顯高于穩(wěn)定斑塊組（P<0.01）；三組中內(nèi)脂素mRNA表達(dá)量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=22.977，P<0.01）。
　　2.L-PGDS mRNA表達(dá)量于不穩(wěn)定斑塊組明顯低于穩(wěn)定斑塊組及對(duì)照組（P<0.01）；穩(wěn)定斑

14、塊組L-PGDS蛋白表達(dá)量也明顯低于對(duì)照組（P<0.01）；三組中L-PGDS蛋白表達(dá)量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=25.388，P<0.01）。
　　3.應(yīng)用Spearson相關(guān)性分析顯示，穩(wěn)定動(dòng)脈硬化斑塊組中內(nèi)脂素和L-PGDS mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.505，P=0.021），在不穩(wěn)定動(dòng)脈硬化組中內(nèi)脂素和L-PGDS mRNA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.609，P=0.021）。
　　結(jié)論：
　　1.內(nèi)脂素和L-