LP-PLA2及PTX3在人股動脈粥樣硬化斑塊中表達(dá)的相關(guān)研究.pdf

1、研究背景:
　　目前，隨著中國經(jīng)濟(jì)和社會的快速發(fā)展，人民生活水平得到了顯著的提高。飲食習(xí)慣也有了改變，高脂肪，高膽固醇的食物攝入量增加，生活節(jié)奏的加快，工作壓力大，體力活動減少，以及老齡化社會的發(fā)展，導(dǎo)致動脈粥樣硬化的發(fā)病率逐年上升。動脈粥樣硬化是大多數(shù)心血管疾病的潛在因素，動脈硬化多見于中老年男性和絕經(jīng)期后的女性。此病常與高血壓，高膽固醇和糖尿病相伴。腦力勞動者較多見，其對人民健康的危害是非常巨大的，由此產(chǎn)生的并發(fā)癥已對中國老年

2、人口的健康構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅。下肢動脈硬化閉塞癥(ArteriosclerosisObliterans，ASO)是下肢動脈的一種退行性病變，病因在于動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)。近些年來，發(fā)病率逐漸上升。其臨床表現(xiàn)為患肢皮溫降低、怕冷、活動后易疲勞、間歇性跛行、靜息痛、潰瘍、壞疽，甚至威脅生命。已嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量?，F(xiàn)階段對ASO的相關(guān)治療主要有藥物治療，手術(shù)治療以及基因治療和干細(xì)胞移植治療等，但是總體治療效果

3、十分有限。目前，ASO的發(fā)病機(jī)制有脂質(zhì)浸潤學(xué)說，血流動力學(xué)理論，中膜平滑肌細(xì)胞增殖和內(nèi)膜損傷理論等理論學(xué)說。近來國外學(xué)者研究表明ASO是感染、血脂紊亂、炎癥反應(yīng)等共同參與的慢性疾病。目前，深入研究ASO的發(fā)病機(jī)制以及疾病的進(jìn)展，制定和改進(jìn)其診斷、治療的方法，努力實(shí)現(xiàn)ASO的盡早發(fā)現(xiàn)、盡早診斷、盡早治療。減少患者并發(fā)癥的發(fā)生率，提高患者的生活質(zhì)量，已成為急需解決的問題。LP-PLA2是一種和AS有著緊密聯(lián)系的被高度關(guān)注的磷脂酶A2超家族的

4、一種。LP-PLA2是一種新的炎癥酶，與心血管疾病的發(fā)生，發(fā)展有著重要的聯(lián)系。其在血漿中主要與低密度脂蛋白(low-densitylipoprotein，LDL)結(jié)合，能水解LDL，生成ox-FA和Lyso-PC，繼而加速AS的發(fā)生和發(fā)展。研究顯示LP-PLA2參與AS發(fā)生、發(fā)展的各個環(huán)節(jié)，在動脈粥樣硬化斑塊的形成、發(fā)展、破裂的過程中均扮演著重要的角色。正五聚體蛋白-3（pentraxin-3，PTX3）是國外學(xué)者最近研究發(fā)現(xiàn)的由381

5、個氨基酸組成的五聚體結(jié)構(gòu)蛋白，PTX3是構(gòu)成長正五聚蛋白的主要成員，是一種急性期反應(yīng)蛋白。目前，國內(nèi)外學(xué)者研究表明炎癥反應(yīng)在AS的病理進(jìn)程中有著舉足輕重的作用。PTX3與冠狀動脈粥樣硬化斑塊的易損性密切相關(guān)，在破裂的冠狀動脈斑塊中檢測到了PTX3的高表達(dá)。然而，在ASO患者的股動脈粥樣硬化斑塊中，LP-PLA2和PTX3的表達(dá)水平是否存在變化，以及二者之間是否有一定關(guān)聯(lián)性，目前未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。
　　研究目的:
　　探討人股

6、動脈粥樣硬化斑塊中LP-PLA2與PTX3的表達(dá)水平相互的變化及臨床意義，以及兩者之間的關(guān)系。希望進(jìn)一步探討ASO的發(fā)病機(jī)制。
　　材料和方法:
　　1.收集自2011年9月至2013年3月在鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院及河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院血管外科行下肢股動脈內(nèi)膜剝脫術(shù)后股動脈粥樣硬化斑塊標(biāo)本31例（其中男性18例，女性13例，平均年齡:55.45±9.40歲），所有病例術(shù)前均有下肢缺血病史，并且術(shù)前均經(jīng)下肢動脈彩色多普勒和血

7、管造影(CTA)等檢查證實(shí)為下肢動脈硬化閉塞癥。同時選取外傷股骨骨折損傷股動脈后，行股動脈自體大隱靜脈搭橋術(shù)中切除的股動脈標(biāo)本8例（男性5例，女性3例，平均年齡:50.50±8.85歲）作為對照組。術(shù)前排除門靜脈高血壓，動脈硬化，全身性炎癥性疾病，腫瘤史。每位受試患者均簽署《人體斑塊組織科學(xué)研究同意書》。標(biāo)本離體后迅速分成兩等分，一份用10％甲醛溶液固定，另一份迅速放入液氮灌中，后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱備用。
　　2.對獲取的標(biāo)本進(jìn)行

8、HE染色，并根據(jù)其形態(tài)學(xué)差異將股動脈粥樣硬化斑塊分成穩(wěn)定組（14例），不穩(wěn)定組（17例）。另8例正常股動脈作為對照組。
　　3.采用免疫組織化學(xué)SP法測定三組標(biāo)本中LP-PLA2蛋白及PTX3蛋白的表達(dá)情況，并分析LP-PLA2蛋白及PTX3蛋白變化的意義以及二者彼此之間的關(guān)系。
　　4.采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法分別檢測三組中LP-PLA2mRNA及PTX3mRNA的表達(dá)情況，并分析LP-PLA2mRNA及

9、PTX3mRNA變化的意義以及二者彼此之間的關(guān)系。
　　5.統(tǒng)計(jì)方法:實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，相關(guān)結(jié)果以(x)±s表示，采用Kruskal-Wallis非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。三組間兩兩比較采用Bonferroni法，并應(yīng)用Spearman進(jìn)行相關(guān)分析，分析動脈硬化斑塊組中LP-PLA2蛋白及PTX3蛋白表達(dá)的相關(guān)性，以及LP-PLA2mRNA及PTX3mRNA的表達(dá)相關(guān)性。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，以p＜0.05有統(tǒng)

10、計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　一、免疫組織化學(xué)結(jié)果:
　　1.LP-PLA2蛋白在斑塊組織中均有較強(qiáng)的表達(dá)，在對照組中表達(dá)較弱。LP-PLA2蛋白表達(dá)呈棕黃色顆粒，主要分布在炎性細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。三組中LP-PLA2蛋白的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=32.554，P=0.000＜0.001)。穩(wěn)定斑塊組（2.399±0.853）中LP-PLA2蛋白的表達(dá)高于對照組(1.043±0.061)(Z=2.191＞Z0.017=2

11、.1，P＜0.05/3=0.017)，不穩(wěn)定斑塊組（6.142±0.472）中LP-PLA2蛋白的表達(dá)也高于對照組(1.043±0.061)(Z=5.418＞Z0.017=2.1，P＜0.017)，而不穩(wěn)定斑塊組（6.142±0.472）又高于穩(wěn)定斑塊組（2.399±0.853）(Z=3.736＞Z0.017=2.1,P＜0.017)。
　　2.PTX3蛋白在斑塊組織中均有較強(qiáng)的表達(dá)，在對照組中表達(dá)較弱。PTX3蛋白棕黃色顆粒主要

12、分布在炎性細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。三組中PTX3蛋白的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=32.792P=0.000＜0.001)。穩(wěn)定斑塊組（3.081±1.191）中PTX3蛋白的表達(dá)高于對照組(1.057±0.434)(Z=2.177＞Z0.017=2.1，P＜0.017)，不穩(wěn)定斑塊組（9.107±1.131）中PTX3蛋白的表達(dá)也高于對照組(1.057±0.434)(Z=5.421＞Z0.017=2.1，P＜0.017)，而不穩(wěn)定斑塊組（9.

13、107±1.131）又高于穩(wěn)定斑塊組（3.081±1.191）（Z=3.768＞Z0.017=2.1，P＜0.017）。
　　3.對斑塊組織中LP-PLA2蛋白與PTX3蛋白的表達(dá)情況采用Spearman相關(guān)分析顯示二者呈正相關(guān)(rS穩(wěn)定組=0.959，r0.05,14=0.538，p＜0.05;rS不穩(wěn)定組=0.998，r0.05,17=0.485，p＜0.05)，在對照組中兩種蛋白無相關(guān)性(|rS對照組|=|-0.236|，r

14、0.05,8=0.738,p＞0.05)。
　　二、RT-PCR結(jié)果
　　1.三組中LP-PLA2mRNA的表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=31.973，P=0.000＜0.001)，LP-PLA2mRNA在不穩(wěn)定斑塊中的表達(dá)量最高（0.698±0.053），高于穩(wěn)定斑塊組（0.304±0.103）(Z=3.656＞Z0.017=2.1，P＜0.017)，穩(wěn)定斑塊組中LP-PLA2mRNA的表達(dá)量（0.304±0.103）又高

15、于對照組（0.102±0.037）(Z=2.262＞Z0.017=2.1,P＜0.017)。
　　2.三組中PTX3mRNA的表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=32.098，P=0.000＜0.001），PTX3mRNA的表達(dá)量在不穩(wěn)定斑塊組最高（0.773±0.129），高于穩(wěn)定斑塊組（0.358±0.108）（Z=3.673＞Z0.017=2.1，P＜0.017），穩(wěn)定斑塊組(0.358±0.108)中PTX3mRNA的表達(dá)量又高

16、于對照組（0.126±0.006）(Z=2.218＞Z0.017=2.1,P＜0.017)。
　　3.相關(guān)性分析顯示，斑塊組織中LP-PLA2mRNA與PTX3mRNA的表達(dá)呈正相關(guān)(rS穩(wěn)定組=0.995，r0.05，14=0.538，p＜0.05;rS不穩(wěn)定組=0.963，r0.05，17=0.485，p＜0.05)，兩者的表達(dá)在對照組中無相關(guān)性（|rS對照組|=|-0.561|，r0.05,8=0.738，p＞0.05）。<