人股動脈粥樣硬化斑塊中E-FABP與FAS的表達.pdf

1、背景:
　　 下肢動脈硬化閉塞癥(ArteriosclerosisObliterans，ASO)是全身動脈粥樣硬化(Arteriosclerosis，AS)的局部表現(xiàn)。近年來，隨著生活水平的提高及人口老齡化，發(fā)病率逐年上升，ASO的臨床表現(xiàn)主要為間歇性跛行、靜息痛、缺血性潰瘍甚至壞疽等，嚴重影響患者的生命安全和生活質量。目前對ASO的治療包括內(nèi)科藥物治療、外科手術及基因和干細胞移植等，治療效果均不容樂觀。ASO發(fā)病機制尚不十分明

2、確，主要的學說包括損傷應答學說、脂質滲入學說、單核巨噬細胞作用學說等。近來研究認為AS是血脂紊亂和炎癥反應共同參與的慢性疾病。積極研究ASO的發(fā)病機制和改進診斷治療方法，爭取早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，提高生存率，降低截肢率，改善患者生活質量，意義重大。
　　 表皮型脂肪酸結合蛋白（EpidermalFattyAcidBindingProtein，E-FABP）是脂肪酸結合蛋白(FattyAcidBindingProteins，F(xiàn)A

3、BPs)的一個亞型，是能把脂肪酸從細胞膜轉運至細胞內(nèi)如巨噬細胞等脂肪酸利用位點，在長鏈脂肪酸的代謝中起重要作用的一種低分子質量的胞漿蛋白。研究顯示脂肪細胞型脂肪酸結合蛋白（Adipocytefattyacidbindingprotei，A-FABP）在人頸動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)，尤其在巨噬細胞內(nèi)表達增高。E-FABP和A-FABP高度同源。脂肪酸合成酶(FattyAcidSynthase，F(xiàn)AS)是體內(nèi)催化合成長鏈飽和脂肪酸的關鍵酶，研究表

4、明乳腺癌中E-FABP可能結合和轉運FAS合成的長鏈脂肪酸到細胞內(nèi)代謝位點。在人股動脈粥樣硬化的斑塊中，E-FABP與FAS的表達是否有變化及兩者關系情況，尚未見文獻報告。
　　 目的:
　　 探討人股動脈粥樣硬化斑塊中表皮型脂肪酸結合蛋白與脂肪酸合成酶表達水平的變化及意義。
　　 方法:
　　 1.收集鄭州大學第二附屬醫(yī)院2010年10月至2012年5月股動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)膜剝脫術中獲取的股動脈粥樣硬化

5、斑塊標本21例，其中男性12例，女性9例，平均年齡56.73±6.23歲，每位患者術前均經(jīng)彩超和下肢動脈造影確診。同期收集我院普外科外傷性脾破裂脾切除術中獲取的脾動脈標本13例，其中男性8例，女性5例，平均年齡52.12±3.41歲。所有入選患者術前均排除腫瘤、全身炎癥性疾病、自身免疫性疾病等。每位受試患者均簽訂《人股動脈粥樣硬化斑塊研究和知情同意書》。術中獲取標本后簡單去除殘留血跡和周圍組織后，每個標本分為兩等份，一份用10％甲醛固定

6、，一份放入液氮罐轉移至-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br>　　 2.HE染色組織形態(tài)學觀察，并將股動脈粥樣斑塊分為不穩(wěn)定斑塊組（12例）和穩(wěn)定斑塊組（9例），13例正常脾動脈組為對照組。
　　 3.免疫組織化學SP法檢測各組標本中E-FABP與FAS蛋白的表達，分析斑塊中E-FABP與FAS蛋白表達變化的意義及兩者表達之間的關系。
　　 4.逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)法檢測各組標本中E-FABP與FASmRNA的表

7、達，分析斑塊中E-FABP與FASmRNA表達變化的意義及兩者表達之間的關系。
　　 5.統(tǒng)計學處理:采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學分析，結果用(x)±s表示，3組E-FABP、FAS蛋白和mRNA表達的比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t法，應用Pearson相關分析動脈粥樣硬化斑塊中E-FABP、FAS蛋白和mRNA表達的關聯(lián)性。檢驗水準α=0.05。
　　 結果:
　　 一、病理形態(tài)學觀察

8、
　　 HE染色顯示對照組脾動脈三層（內(nèi)膜、中膜、外膜）完整，內(nèi)外彈力層均可見，細胞呈多層環(huán)狀分布排列，內(nèi)皮細胞呈線狀連續(xù)排列;不穩(wěn)定斑塊組細胞排列紊亂，斑塊內(nèi)脂質壞死核心面積與斑塊面積之比大于等于40％，脂質核心常呈偏心型，斑塊內(nèi)可見大量的泡沫細胞和炎性細胞，可見膽固醇結晶及新生血管，纖維帽薄;穩(wěn)定性斑塊組脂質壞死核心面積與斑塊面積之比小于40％或沒有，纖維帽較厚，泡沫細胞及炎性細胞少見，可見鈣化灶。
　　 二、免疫組

9、織化學結果
　　 1.E-FABP蛋白在不穩(wěn)定斑塊組和穩(wěn)定斑塊組中均有較強表達，在對照組中有微量表達，E-FABP蛋白棕黃色顆粒主要聚集在炎性細胞和泡沫細胞浸潤的區(qū)域。3組中E-FABP的表達差異有統(tǒng)計學意義(F=35.554，P＜0.001)。與對照組(1.950±0.069)比較，動脈粥樣斑塊中E-FABP蛋白的表達明顯增高(P＜0.001)，不穩(wěn)定斑塊組E-FABP蛋白的表達（2.155±0.060）高于穩(wěn)定斑塊組（2.0

10、81±0.051）(P=0.011)。
　　 2.FAS蛋白在不穩(wěn)定斑塊組和穩(wěn)定斑塊組中均有較強表達，在對照組中有少量表達，F(xiàn)AS蛋白棕黃色顆粒主要聚集在炎性細胞和泡沫細胞浸潤的區(qū)域。3組中FAS蛋白的表達差異有統(tǒng)計學意義(F=125.843，P＜0.001)。與對照組(1.971±0.038)比較，動脈粥樣斑塊中FAS蛋白的表達明顯增高(P＜0.001)，不穩(wěn)定斑塊組FAS蛋白的表達(2.170±0.028)高于穩(wěn)定斑塊組（2

11、.083±0.024）(P＜0.001)。
　　 3.相關性分析顯示，動脈粥樣硬化斑塊中E-FABP與FAS蛋白的表達呈正相關（r不穩(wěn)定組=0.907,P＜0.001;r穩(wěn)定組=0.675，P=0.046），而在對照組中兩者無相關性(r=0.138,P=0.654)。
　　 三、RT-PCR結果
　　 1.3組中E-FABPmRNA的表達差異有統(tǒng)計學意義(F=11.142，P＜0.001)。與對照組（1.156±

12、0.144）比較，動脈粥樣斑塊中E-FABPmRNA的表達明顯增高(P＜0.001)，不穩(wěn)定斑塊組E-FABPmRNA的表達（1.593±0.312）高于穩(wěn)定斑塊組（1.365±0.206）(P=0.033)。
　　 2.3組中FASmRNA的表達差異有統(tǒng)計學意義(F=11.176，P＜0.001)。與對照組（1.103±0.149）比較，動脈粥樣斑塊中FASmRNA的表達明顯增高(P＜0.001)，不穩(wěn)定斑塊組FASmRNA的

13、表達（1.423±0.201）高于穩(wěn)定斑塊組(1.260±0.147)(P=0.037)。
　　 3.相關性分析顯示，動脈粥樣硬化斑塊中E-FABP與FASmRNA的表達呈正相關（r不穩(wěn)定組mRNA=0.650，P=0.022;r穩(wěn)定組mRNA=0.778，P=0.014），而在對照組中兩者無相關性(r=0.120,P=0.696)。
　　 結論:
　　 1.人股動脈粥樣硬化斑塊中E-FABP與FAS的表達上調。